[发明专利]一种纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白及其制备方法在审
| 申请号： | 202210962053.6 | 申请日： | 2022-08-11 |
| 公开（公告）号： | CN116003623A | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 魏文培;乔莎;郝东;赵硕文;李敏;侯增淼 | 申请（专利权）人： | 西安德诺海思医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N15/66;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/36;A61K8/64;A61K8/65;A61Q19/00;C12R1/84 |
| 代理公司： | 深圳市精英专利事务所 44242 | 代理人： | 李莹 |
| 地址： | 710000 陕西省西安市沣东新城科源三路1*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白 胶原 融合 及其 制备 方法 | ||
1.一种纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白包括如下氨基酸肽段：
纤连蛋白肽段，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；
胶原蛋白肽段，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白，其特征在于：还包括连接肽肽段，氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。
4.一种纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.设计目的基因；
B.构建pPIC9k-Fn-HLC重组质粒；
C.pPIC9k-Fn-HLC重组质粒转化GS115酵母感受态；
D.GS115/pPIC9k-Fn-HLC酵母转化子的鉴定及表达；
E.融合蛋白的发酵及纯化。
5.根据权利要求4所述的纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述目的基因为SEQ.ID.NO.5所示的核酸序列。
6.根据权利要求4所述的纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，利用XhoI和NotI限制性内切酶对人工合成的序列及毕赤酵母通用载体进行双酶切，酶切后回收对应的目的基因及载体，利用T4DNA连接酶连接转化大肠杆菌，再测序后获得pPIC9k-Fn-HLC重组质粒。
7.根据权利要求4所述的纤连蛋白和胶原蛋白的融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤C中，利用SaLI线性化pPIC9k-Fn-HLC重组质粒后对其进行纯化回收，将pPIC9k-Fn-HLC重组质粒电转化至毕赤酵母GS115，G418筛选高拷贝转化子。
8.一种核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含权利要求1-3任意一项所述的纤连蛋白和胶原蛋白融合蛋白的核苷酸序列或其互补序列。
9.一种载体，其特征在于：含有权利要求8所述的核酸分子。
10.如权利要求1-3任意一项所述的融合蛋白在化妆品或医美产品中的应用。
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