[发明专利]一种高通量特异性捕获miRNA的DNA载体制备方法及其应用在审
| 申请号： | 202210963859.7 | 申请日： | 2022-08-11 |
| 公开（公告）号： | CN115181782A | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | 林怡卿;万辉鹏;陈偲翊;周思洁;刘洋;孔蕴源;吴宏文;陈淑兰 | 申请（专利权）人： | 南昌大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 330019 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通量 特异性 捕获 mirna dna 载体 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种高通量特异性捕获miRNA的DNA载体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)环状DNA支架链的线性化；
(2)设计miRNA特异性检测探针；
(3)双链DNA载体的组装。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)选取M13噬菌体环状单链质粒，通过限制性核酸内切酶进行酶切后，获得一条线性单链DNA。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)具体包括根据步骤(1)中获得的线性单链DNA序列设计多个与之互补的线性骨架寡核苷酸，并根据步骤(1)中获得的线性单链DNA序列和目标miRNA的序列联合设计一对与之互补的检测探针：检测探针1和检测探针2。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)具体包括将步骤(1)中获得的线性单链DNA与步骤(2)中设计合成的线性骨架寡核苷酸以及检测探针1和检测探针2混合反应退火后，获得一条包含miRNAs特异识别序列的捕获miRNA的DNA载体。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)M13噬菌体环状单链质粒浓度为250μg/ml；所述限制性核酸内切酶包括浓度为20000U/ml的BtsCI酶或BamHI、HincII、HindIII、PacI、EcoRI、Eco53kI、MscI、NaeI、BspHI、SmaI酶；步骤(2)线性骨架寡核苷酸：与线性单链DNA序列互补的单链DNA。
6.权利要求1～5任一制备方法制备的捕获miRNA的DNA载体。
7.包括权利要求6所述捕获miRNA的DNA载体的检测细胞RNA提取物中目标miRNA的试剂。
8.包括权利要求7所述试剂的试剂盒。
9.权利要求1～5所述制备方法或权利要求6所述载体或权利要求7所述试剂或权利要求8所述试剂盒在液体活检中的应用。
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