[发明专利]一种热稳定性提高的α-葡萄糖苷酶环化突变体及其构建方法在审
| 申请号： | 202210967823.6 | 申请日： | 2022-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN116064480A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 张显;饶志明;王志;胡孟凯;徐美娟;杨套伟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/26 | 分类号： | C12N9/26;C07K19/00;C12N15/56;C12N15/62;C12N15/75;C12N1/21;C12P19/14;C12P19/12;C12P19/04;C12P19/00;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 热稳定性 提高 葡萄 糖苷酶 环化 突变体 及其 构建 方法 | ||
1.一种α-葡萄糖苷酶的突变体，其特征在于，所述突变体是将α-葡萄糖苷酶的N端和C端分别连上不同的异肽键得到的；所述异肽键选自(a)～(c)任一组：
(a)N端：AHIVMVDAYKPTK；C端：VDTLSGLSSEQGQSGDMTIEEDSATHIKFSKRDEDGKELAGATMELRDSSGKTISTWISDGQVKDFYLYPGKYTFVETAAPDGYEVATAITFTVNEQGQVTVNGKATKGDAHI；
(b)N端：KLGDIEFIKVNK；C端：KPLRGAVFSLQKQHPDYPDIYGAIDQNGTYQNVRTGEDGKLTFKNLSDGKYRLFENSEPAGYKPVQNKPIVAFQIVNGEVRDVTSIVPQDIPATYEFTNGKHYITNEPIPPK；
(c)N端：DPIVMIDNDKPIT；C端：LSGETGQSGNTTIEEDSTTHVKFSKRDANGKELAGAMIELRNLSGQTIQSWISDGTVKVFYLMPGTYQFVETAAPEGYELAAPITFTIDEKGQIWVDS。
2.根据权利要求1所述的α-葡萄糖苷酶的突变体，其特征在于，所述α-葡萄糖苷酶含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
3.编码权利要求1或2所述α-葡萄糖苷酶突变体的基因。
4.携带权利要求3所述基因的重组载体。
5.携带权利要求3所述基因或表达权利要求1～2任一所述突变体的重组微生物细胞。
6.根据权利要求5所述的重组微生物细胞，其特征在于，以枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)为表达宿主。
7.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌168为宿主，以pMA5为载体，表达权利要求1或2所述的α-葡萄糖苷酶的突变体。
8.一种提高α-葡萄糖苷酶热稳定性的方法，其特征在于，将α-葡萄糖苷酶的N端和C端分别连上不同的异肽键；所述异肽键选自(a)～(c)任一组：
(a)N端：AHIVMVDAYKPTK；C端：VDTLSGLSSEQGQSGDMTIEEDSATHIKFSKRDEDGKELAGATMELRDSSGKTISTWISDGQVKDFYLYPGKYTFVETAAPDGYEVATAITFTVNEQGQVTVNGKATKGDAHI；
(b)N端：KLGDIEFIKVNK；C端：KPLRGAVFSLQKQHPDYPDIYGAIDQNGTYQNVRTGEDGKLTFKNLSDGKYRLFENSEPAGYKPVQNKPIVAFQIVNGEVRDVTSIVPQDIPATYEFTNGKHYITNEPIPPK；
(c)N端：DPIVMIDNDKPIT；C端：LSGETGQSGNTTIEEDSTTHVKFSKRDANGKELAGAMIELRNLSGQTIQSWISDGTVKVFYLMPGTYQFVETAAPEGYELAAPITFTIDEKGQIWVDS。
9.生产权利要求1或2所述突变体的方法，其特征在于，将权利要求5～6任一所述的重组微生物细胞或权利要求7所述的重组枯草芽孢杆菌在培养基中培养，收集细胞培养液中的α-葡萄糖苷酶突变体。
10.权利要求1或2所述突变体，或权利要求3所述基因，或权利要求4所述的重组载体，或权利要求5或6所述的重组微生物细胞，或权利要求7所述的重组枯草芽孢杆菌在转化麦芽糖生产低聚异麦芽糖中的应用。
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