[发明专利]JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用在审
| 申请号： | 202210968253.2 | 申请日： | 2022-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN116064461A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 陈素娟;杨辉;彭大新;秦涛 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/867;C12N5/10;C12N15/113;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 董建林 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | jak1 蛋白 泛素化位点 制备 干扰素 耐受 细胞 中的 应用 | ||
1.JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，所述JAK1蛋白泛素化位点位于JAK1蛋白第859和860位，JAK1氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.如权利要求1所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，JAK1核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.如权利要求1所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，所述JAK1蛋白来源为哺乳动物。
4.如权利要求1所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，所述JAK1蛋白第859和860位的K突变为R后，消除JAK1的泛素化位点，解除JAK1所受到的泛素化调控。
5.如权利要求1所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，位点突变采用的引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。
6.如权利要求1所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，所述的细胞为HEK293T，MDCK，A549细胞。
7.如权利要求1所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，构建用于慢病毒包装的shRNA质粒，将shRNA或shJAK1和JAK1质粒的转染HEK293T细胞，进行慢病毒包装，将质粒进行转染，收集包含病毒的培养液。
8.如权利要求7所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，所述JAK1基因的shRNA靶点序列如下：
shJAK-1#序列为SEQ ID NO：5；
shJAK-2#序列为SEQ ID NO：6。
9.如权利要求7所述的JAK1蛋白泛素化位点在制备干扰素耐受细胞中的应用，其特征在于，包装好的shJAK1慢病毒感染HEK293T，48h后，加入Puromycin筛选，待细胞没有明显的死亡现象后再进行有限稀释法亚克隆；3代后的细胞用作稳定表达的细胞系。
10.JAK1蛋白泛素化位点的引物，其特征在于，所述JAK1蛋白泛素化位点位于JAK1蛋白第859和860位，所述的引物序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示。
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