[发明专利]一种牛支原体平板凝集抗原及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种牛支原体平板凝集抗原，其特征在于，使用牛支原体XBY01株制成，所述牛支原体平板凝集抗原中含有牛支原体XBY01株菌体的灭活前浓度为1.0×10¹¹CCU/mL。

2.一种权利要求1所述的牛支原体平板凝集抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将牛支原体XBY01株传代后制成基础种子液；

(2)将基础种子液接种于牛支原体培养基中扩大培养，获得生产种子液；

(3)将生产种子液进行发酵培养，并对菌液进行CCU计数和无菌检验；

(4)在发酵培养菌液中加入含硫柳汞的PBS重悬灭活，按CCU计数结果调整菌液浓度，加入结晶紫溶液染色和甘油制备得到牛支原体平板凝集抗原，混匀后分装保存。

3.根据权利要求2所述的牛支原体平板凝集抗原的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)基础种子液的制备：取牛支原体XBY01株冻干菌种，开启后，按10％的量接种于牛支原体培养基，置37℃培养18～36h，收获后作为一级基础种子，将一级基础种子液按10％比例再接种传代1次，收获分装后置-80℃冻存，作为二级基础种子；

(2)生产种子液的制备：取二级基础种子，按10％比例接种于生产用牛支原体培养基，置37℃恒温摇床，120rpm震荡培养18～36h至培养基变为黄色，扩大培养，获得生产种子液；

(3)发酵培养：采用生物反应器大规模培养牛支原体XBY01株，先对生物反应器进行灭菌，无菌加入牛支原体培养基，按1:10的比例接种生产种子液，37℃恒温培养，严格控制不通气，待pH下降至6.9～7.0时，添加牛支原体培养基为原培养体积的20％，进行两次补料培养，待第二次培养pH下降到6.7～6.8时收获菌液，并对菌液进行CCU计数和无菌检验；

(4)抗原制备：在菌液中加入0.2～0.4％羟甲基纤维素钠，置2～8℃静置7～10日，8000rpm离心菌液10min，取沉淀用含0.01％硫柳汞的PBS重悬，调整菌液浓度为1.1×10¹¹CCU/mL，置37℃灭活3小时；反复搅拌均匀后，加入3％结晶紫溶液至终浓度为0.03％进行染色，继续搅拌20分钟，加入10％菌液体积的甘油，继续搅拌10分钟，即得到牛支原体平板凝集抗原，分装后置2～8℃保存。

4.权利要求1所述的牛支原体平板凝集抗原在牛支原体感染检测中的应用。