[发明专利]一种牛支原体平板凝集抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种牛支原体平板凝集抗原及其制备方法与应用。牛支原体平板凝集抗原使用牛支原体XBY01株制成，制备方法为将牛支原体XBY01株传代后制成种子菌液，再接种牛支原体培养基中扩大培养，收获，经活菌计数后，离心收获菌泥，加入1/10倍体积的含0.01％硫柳汞的PBS重悬灭活，按活菌计数结果调整抗原体积，加入终浓度0.03％的结晶紫溶液染色和菌液体积10％的甘油，混匀后分装保存。本发明制备的牛支原体平板凝集抗原，具有较高的敏感性和特异性，操作简单，结果易观察等优点，适合于牧场的牛支原体感染的快速筛查和检测。发明的工艺简单、成本低、稳定性好，适合于规模化生产和应用。

技术领域

本发明属于兽医诊断技术领域，具体涉及一种牛支原体平板凝集抗原及其制备方法与应用。

背景技术

牛支原体病是由牛支原体引起的以犊牛肺炎、关节炎、成年奶牛乳腺炎等症状的传染病，发病率高，犊牛感染死亡率可达20％。牛支原体病在世界范围内普遍存在，我国山东、河南、湖北、辽宁大部分省市均有发生，其主要传播途径是水平传播，包括直接接触或经呼吸道、生殖道、乳头传播。胎儿可在分娩过程中接触带有牛支原体的母牛分泌物而感染，新生犊牛还可因吸吮或饮用了患有牛支原体乳腺炎乳汁而感染。该病每年给我国养牛业造成巨大的经济损失，严重影响养牛和奶业的健康发展。

当前我国已通过注册可用于牛支原体病检测的试剂盒有：牛支原体环介导等温扩增检测试剂盒和牛支原体ELISA抗体检测试剂盒两个品种，但中国兽药信息网的国家基础数据库(http://vdts.ivdc.org.cn:8081/cx/)显示，自2019年至今，均无生产和批签发记录。由此可判断当前我国批准生产的牛支原体检测试剂，与实际需求存在差距，无法满足当前生产需要。经与养殖企业和行业技术专家交流，牛支原体检测需要的是能简单快速、可视化的现场检测试剂。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种牛支原体平板凝集抗原及其制备方法与应用。选用牛支原体XBY01株研制开发的平板凝集抗原及其对照血清，用于牛血清中牛支原体抗体的快速检测，有助于解决我国当前牛支原体感染检测和防控中的问题。

为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

提供一种牛支原体平板凝集抗原，其使用牛支原体XBY01株制成，含牛支原体XBY01株菌体灭活前活菌浓度为1.0×10¹¹CCU/mL。

提供一种牛支原体平板凝集抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)将牛支原体XBY01株传代后制成基础种子液；

(2)将基础种子液接种于牛支原体培养基中扩大培养，获得生产种子液；

(3)将生产种子液进行发酵培养，并对菌液进行CCU计数和无菌检验；

(4)在发酵培养菌液中加入含硫柳汞的PBS重悬灭活，按CCU计数结果调整菌液浓度，加入结晶紫溶液染色和甘油制备得到牛支原体平板凝集抗原，混匀后分装保存。

进一步地，牛支原体平板凝集抗原的制备方法具体包括以下步骤：

(1)基础种子液的制备：取牛支原体XBY01株冻干菌种，开启后，按10％的量接种于牛支原体培养基，置37℃培养18～36h，收获后作为一级基础种子，将一级基础种子液按10％比例再接种传代1次，收获分装后置-80℃冻存，作为二级基础种子；

(2)生产种子液的制备：取二级基础种子，按10％比例接种于生产用牛支原体培养基，置37℃恒温摇床，120rpm震荡培养18～36h至培养基变为黄色，扩大培养，获得生产种子液；