[发明专利]野生刺槐范氏孔菌的诱变、栽培方法、刺槐范氏孔菌及应用

权利要求书

1.一种基于野生刺槐范氏孔菌的诱变方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将野生刺槐范氏孔菌的孢子溶于无菌的生理盐水中进行稀释，并用血球计数板计数，稀释至孢子悬液中孢子的浓度量级为10⁷个/ mL -10⁸个/mL，得到孢子悬液；

步骤二、制备诱变培养基：诱变培养基由以下重量份的原料组成：野生刺槐范氏孔菌原液为5-15份，玉米淀粉为35-40份、麦麸为15-25份、蔗糖为8-12份、葡萄糖为8-12份、磷酸二氢钾为1.8-2.2份、硫酸镁为0.9-1.1份、酵母粉为5-7份、VB1为0.008-0.012份、琼脂为16-20份和水为800-1200份，控制所述诱变培养基的ph值为6.3-6.5；

与所述孢子同株的野生刺槐范氏孔菌子实体与水按质量比为1:（5-10）混合后煮沸、过滤，得到野生刺槐范氏孔菌原液；

步骤三、将所述孢子悬液与步骤一所述孢子同株的野生刺槐范氏孔菌的菌丝同时接种于同一诱变培养基内，所述孢子悬液与诱变培养基的体积比为1：（2-3），然后在26℃的温度下培养2d后，再利用⁶⁰Co-γ射线照射，照射剂量为1150Gy-1200Gy，照射三次，时间间隔为2小时，三次照射时间依次为20s、40s、60s ，得到诱变后刺槐范氏孔菌；

步骤四：将得到的诱变后刺槐范氏孔菌在步骤二中的诱变培养基中再次进行培育，连续传代至少3次后，获得遗传稳定的诱变后刺槐范氏孔菌。

2.一种刺槐范氏孔菌的栽培方法，其特征在于，所述刺槐范氏孔菌是由权利要求1所述的诱变方法得到的，其包括以下步骤：

母种培育，将诱变后刺槐范氏孔菌无菌接入母种培养基进行组织培养，再经过6d-8d的纯化，菌种长满试管，获得刺槐范氏孔菌纯母种；所述纯化步骤为：诱变后刺槐范氏孔菌在母种培养基进行组织培养时保持温度为24℃-28℃，培养3d-4d长出白色绒毛状菌丝体，当菌丝延伸到母种培养基上后，用接菌针挑取菌丝顶端部分，接菌到新的母种培养基上；

所述母种培养基为添加了槐树皮汁和蛋白胨的复合CPDA培养基；

原种制备，将刺槐范氏孔菌纯母种进行活化和扩繁，然后接入原种培养基，在温度为25℃-28℃的培养室内培养，培养时间25d-30d，获得刺槐范氏孔菌原种；

栽培种制备，将刺槐范氏孔菌原种接入栽培种培养基，在温度为25℃-28℃的培养室内培养，培养时间为25d-30d，获得刺槐范氏孔菌栽培种；

出耳管理与采收，将刺槐范氏孔菌栽培种继续培养10d-12d后移至出菇房出菇，出菇期间保持通风和湿度，待长出的子实体有大量白色孢子弹射，且菌盖不再增大时采收。

3.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，所述复合CPDA培养基由以下重量份的原料组成：新鲜马铃薯200-250份、槐树皮20-25份、水1000-1500份、葡萄糖18-22份、琼脂18-22份、磷酸二氢钾1.8-2.2份和硫酸镁0.8-1.5份。

4.根据权利要求3所述的栽培方法，其特征在于，所述复合CPDA培养基的制备方法为：将新鲜马铃薯洗净去皮后切碎，得到马铃薯块；将200g-250g马铃薯块和20g-25g槐树皮加入1L-1.5L水煮沸25min-35min，经过纱布过滤后的滤液加水补足至1L，再加入18g-22g葡萄糖、18g-22g琼脂、1.8g-2.2g磷酸二氢钾和0.8g-1.5g硫酸镁后加热充分溶解得到未灭菌的复合CPDA培养基，将未灭菌的复合CPDA培养基进行分装到试管，每支试管分装5mL-10mL；将分装未灭菌的复合CPDA培养基试管经121℃灭菌20分钟后，取出试管摆斜面，冷却后储存备用。

5.根据权利要求4所述的栽培方法，其特征在于：母种培养期间保持温度24℃-28℃，相对空气湿度控制在75%以下，且避光培养。

6.根据权利要求5所述的栽培方法，其特征在于，所述原种培养基和栽培种培养基均包括：杂木屑75份-80份，麸皮13份-17份，黄豆粉4份-5份，蔗糖1份-1.5份，石膏粉0.5份-1.5份，所述原种培养基包括的PH值为5-6，含水量为55%-60%。