[发明专利]野生刺槐范氏孔菌的诱变、栽培方法、刺槐范氏孔菌及应用

说明书

本发明提供一种基于野生刺槐范氏孔菌的诱变方法、刺槐范氏孔菌的栽培方法、刺槐范氏孔菌及其应用，属于刺槐范氏孔菌技术领域。为解决刺槐范氏孔菌子实体难以人工培育，诱变效果较差问题。通过supgt;60/supgt;Co‑γ对含有野生刺槐范氏孔菌原液的野生刺槐范氏孔菌孢子悬液诱变，诱变后刺槐范氏孔菌在母种培养基中培育后经过培育后获得新品种刺槐范氏孔菌。实现刺槐范氏孔菌子实体人工培育；通过添加野生刺槐范氏孔菌原液后提高耐受性，进而提高诱变效果；通过拮抗试验可知，获得的刺槐范氏孔菌为新品种刺槐范氏孔菌，保藏编号为CGMCC No.40140；连续二年栽培试验结果表明，刺槐范氏孔菌新品种性状稳定，子实体亩产可达1000斤。

技术领域

本发明涉及刺槐范氏孔菌技术领域，具体而言，涉及一种基于野生刺槐范氏孔菌的诱变方法、刺槐范氏孔菌的栽培方法、刺槐范氏孔菌及其应用。

背景技术

《中国真菌志》（科学出版社，2021年2月第一版，205-206页）中提到，刺槐范氏孔菌的主要特征是担子果一年生。刺槐范氏孔菌，生长于槐及洋槐、青檀等树干上。该类真菌分布于我国北京、江苏、辽宁、陕西、山东、四川等地，通常生长在刺槐的活树上。

刺槐范氏孔菌药用价值极高，作为靶向抗肿瘤药物可用于治疗肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌等。刺槐范氏孔菌野生资源稀缺，子实体难以人工培育。目前仅以固体发酵法生产刺槐范氏孔菌菌质，以液体培养法生产菌丝体供药用。但刺槐范氏孔菌药用成分原料仅为槐耳菌丝发酵物，而刺槐范氏孔菌子实体的药用功效是远远高于菌丝体的。在成分上，子实体除了多糖体和免疫调节蛋白之外，还有很多二次代谢产物（如刺槐范氏孔菌酸、腺苷），而菌丝体的二次代谢产物就少多了，成分仅仅以多糖体为主。所以从活性成分的“种类”来看，菌丝体是比不了子实体的。在进行刺槐范氏孔菌的研究时，发现以下问题：

1.刺槐范氏孔菌子实体多是直接从其宿主树种上采摘的。但是，由于刺槐范氏孔菌的宿主树种分布稀少，使得其长出的刺槐范氏孔菌子实体的数量也是有限的，因此很难满足药材市场对刺槐范氏孔菌子实体的巨大需求量。

2.为了满足刺槐范氏孔菌的大量培育，在进行人工培育时发现，可人工培育菌丝体，袋料栽培只能长出木栓化的多孔的菌肉组织，难以人工培育正常子实体。

3.菌菇在进行诱变育种时，尤其通过⁶⁰Co-γ进行诱变育种时，诱变剂量通常在100Gy-1000Gy，诱变剂量超过1000Gy时虽然会有效提高诱变率，但菌菇的死亡率接近100%，仍然无法得到有益的诱变育种，导致诱变效果较差。因此，在有效提高诱变率的情况下，控制死亡率90%-95%非常关键。

发明内容

为了解决刺槐范氏孔菌子实体难以人工培育，野生采集数量少，难以满足市场需求，诱变效果较差的问题。

本发明提供了一种基于野生刺槐范氏孔菌的诱变方法，包括以下步骤：

步骤一、取野生刺槐范氏孔菌的孢子溶于无菌的生理盐水中，选取的野生刺槐范氏孔菌如图1所示，用血球计数板计数，稀释至孢子悬液中孢子的浓度量级为10⁷个/ mL -10⁸个/mL，得到孢子悬液；

步骤二、制备诱变培养基：诱变培养基由以下重量份的原料组成：野生刺槐范氏孔菌原液为5-15份，玉米淀粉为35-40份、麦麸为15-25份、蔗糖为8-12份、葡萄糖为8-12份、磷酸二氢钾为1.8-2.2份、硫酸镁为0.9-1.1份、酵母粉为5-7份、VB1为0.008-0.012份、琼脂为16-20份和水为800-1200份，控制所述诱变培养基的ph值为6.3-6.5；

与所述孢子同株的野生刺槐范氏孔菌子实体与水按质量比为1:（5-10）混合后煮沸、过滤，得到野生刺槐范氏孔菌原液；