[发明专利]一种欧月组织培养繁殖方法

说明书

本发明涉及一种欧月组织培养繁殖方法，其包括如下步骤：选取生长健壮、无病虫害、芽体饱满的当年生嫩枝为外植体，用小毛刷蘸中性洗衣粉将茎段洗刷干净，然后用自来水冲2～3h；在超净工作台上用75％酒精处理茎段30s，无菌水冲洗3～5次，随后用0.1％HgCl₂或6％次氯酸钠对茎段进行消毒；茎段接种于初代培养腋芽诱导培养基，培养20d；再依次经继代培养和生根培养。本发明在外植体消毒阶段采用两次消毒的方法，降低了污染率并提高了成活率，使用合理的初代、继代和生根培养基配方和培养条件，可满足产业化繁殖需要。

技术领域

本发明涉及植物繁殖技术，具体涉及一种欧月组织培养繁殖方法。

背景技术

月季是一种集观赏、药用为一体的花卉植物。其繁殖方式可分为：扦插繁殖、嫁接繁殖、播种繁殖、分株繁殖和组织培养等。扦插繁殖和嫁接繁殖在生产上应用较为普遍，但存在费工费时、生产成本高、育苗周期长等诸多问题。月季的组培快繁不仅可以保持品种的优良性状，同时可以实现种苗的工厂化生产，快速满足生产上对高品质种苗的需求。

月季的组培快繁主要包括如下步骤：选择合适的外植体、外植体的消毒、初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽。

朱淑新、袁婉君等学者在月季组培对消毒时间进行了研究，表明消毒时间过短不利于解决外植体的带菌问题，会造成消毒不彻底，从而导致初代培养下的茎段成活率较低，污染率较高。然而，过长的消毒时间会对外植体造成伤害，同样会带来成活率较低的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种成活率高、增殖系数高、植株根系发达的欧月组织培养繁殖方法。

本发明采用如下技术方案：

一种欧月组织培养繁殖方法，其包括如下步骤：

(1)选取生长健壮、无病虫害、芽体饱满的当年生嫩枝为外植体，剪成带2个芽眼，长1～2cm的茎段，剪去叶片和刺、保留1～3个叶柄，用小毛刷蘸中性洗衣粉将茎段洗刷干净，然后用自来水冲2～3h；

(2)在超净工作台上用75％酒精处理茎段30s，无菌水冲洗3～5次，随后用0.1％HgCl₂或6％次氯酸钠对茎段进行消毒；

(3)茎段接种于初代培养腋芽诱导培养基，接种后置于23～27℃培养室，光照强度2000～2500lx，光照时间12～16h/d，培养20d。

(4)将步骤(3)处理得到的茎段接种于继代培养基，接种后置于23～27℃培养室，光照强度2000～2500lx，光照时间12～16h/d，培养40d；

(5)将步骤(4)处理得到的茎段接种于生根培养基，接种后置于23～27℃培养室，光照强度2000～2500lx，光照时间12～16h/d，培养40d。

进一步的，使用0.1％HgCl₂对茎段浸泡消毒5～15min。

进一步的，使用6％次氯酸钠对茎段浸泡消毒15～25min。

进一步的，所述初代培养腋芽诱导培养基为包含6g/L琼脂和100ul/L氢氧化钠的MS培养基，pH为5.8。

进一步的，所述继代培养基为包含1～3mg/L 6-BA和0.1～0.3mg/L NAA的MS培养基，pH为5.8。

进一步的，所述生根培养基为包含0.05～1mg/L NAA的1/2MS培养基，pH为5.8。

本发明的有益效果在于：本发明在外植体消毒阶段采用两次消毒的方法，降低了污染率并提高了成活率。使用合理的初代、继代和生根培养基配方和培养条件，可满足产业化繁殖需要。

附图说明

图1为3个欧月品种不同氯化汞处理茎段萌芽情况；