[发明专利]一种同时检测引起低色素性贫血STEAP3基因突变和eSNP的试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测引起低色素性贫血STEAP3基因突变和eSNP的引物组，其特征在于，包括引物对1-7；

所述引物对1的上下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1-2所示；所述引物对2的上下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示；所述引物对3的上下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO:5-6所示；所述引物对4的上下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:7-8所示；所述引物对5的上下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:9-10所示；所述引物对6的上下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:11-12所示；所述引物对7的上下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:13-14所示。

2.一种同时检测引起低色素性贫血STEAP3基因突变和eSNP的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阴性质控品、eSNP(rs6721852)质控品、PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、LC Green染料、甜菜碱、去离子水、DMSO和石蜡油。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶。

5.一种非诊断目的的同时检测引起低色素性贫血STEAP3基因突变和eSNP的检测方法，其特征在于，采用权利要求3-4中任一项所述的试剂盒进行检测，包括以下步骤：

(1)采集外周血进行DNA抽提，得到样品DNA；

(2)以所述样品DNA、阴性质控品和eSNP(rs6721852)质控品为模板DNA，分别加入PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、LC Green染料、甜菜碱、去离子水、DMSO、上下游引物对1、2、3、4、5、6或7，得到筛查STEAP3基因突变和eSNP分型的反应体系；

(3)将所述反应体系加入至96孔板中，采用石蜡油进行液封后，进行PCR扩增；

(4)待PCR扩增完成后，在高分辨率熔解曲线分析仪上进行荧光检测，得到HRM分析结果。

6.根据权利要求5的检测方法，其特征在于，步骤(2)中反应体系包括以下组分：PCR缓冲液2.0μL，2.5nM dNTPs 1.0μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.4μL，10μM上下游引物1.2μL，1×LC Green 2.0μL，模板DNA 1.5μL，5M甜菜碱4.0μL，DMSO 2.0μL，去离子水5.9μL。

7.根据权利要求5的检测方法，其特征在于，步骤(3)中扩增反应的反应程序为：95℃预变性5分钟；95℃30秒，62℃30秒，72℃30秒，共45个循环；95℃1分钟，4℃保温。

8.根据权利要求5的检测方法，其特征在于，步骤(4)中荧光检测的条件为：起始温度为55℃，终止温度为98℃，待机温度为42℃。