[发明专利]一种诊断阿尔茨海默病的试剂盒及其用途

说明书

本申请具体涉及一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。本申请的方法能够替代传统的脑脊液的p‑tau/Aβ检测，通过6种circRNAs实现对AD的诊断，并且，不仅能够区分AD患者与正常人员，还能够区分AD患者与其他痴呆患者。

技术领域

本申请涉及医药领域、病毒学领域和免疫学领域，特别是免疫学诊断领域。本申请具体涉及一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。

背景技术

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）最常见的生物标志物是Aβ和tau，它们可以通过脑脊液或PET成像检验。然而这个过程是有创的，且非常昂贵，难以在人群中普遍应用。此外，AD与其他类型的痴呆，如血管性痴呆（vascular dementia, VaD）、帕金森病性痴呆（Parkinson disease, PDD）、行为变异性额颞叶痴呆（behavioural variantfrontotemporal dementia, bvFTD）、路易体痴呆（dementia with Lewy bodies, DLB）等，可能存在重叠的临床表现、病理和生物标志物，往往导致临床诊断困难。

CircRNA是一种具有封闭环状结构的非编码RNA，通过吸附miRNA、调节细胞内RNA结合蛋白和参与蛋白质翻译发挥生物学作用。越来越多的研究证实了circRNA与AD之间的关系。研究发现ciRS-7通过下调miR-7的活性降低其对Aβ的清除作用；circ_0000950通过发挥miR-103的分子“海绵”作用而导致神经元损害；circPCCA 可以抑制糖原合成酶激酶-3β的活化并且促进tau蛋白沉积。但是以往的研究样本量小，且未经脑脊液核心标志物证实临床诊断，限制了其临床转化。

基于上述问题，AD的临床治疗急需一种可有效诊断AD及鉴别AD与其他类型痴呆的方法。

发明内容

本申请发明人通过分析两个独立的数据集中AD患者与正常人员的circRNA的差异并使用差异circRNAs组来建立AD诊断模型。并在第三个独立人群中验证了该模型的诊断效能，证实了由血液中6种circRNAs组成的模型能够准确诊断及鉴别诊断AD。因此，本申请的circRNAs有助于AD的诊断。

因此，在第一方面，本申请提供了一种用于诊断受试者是否患阿尔茨海默病的方法，其包括：

（1）从受试者获得包含生物标志物的生物样品；

（2）测定生物样品中生物标志物的水平；和

（3）基于所述生物标志物的水平，诊断受试者是否患阿尔茨海默病；

其中，所述生物标志物为hsa_circ_0077001，hsa_circ_0022417，hsa_circ_0014356，hsa_circ_0014353，hsa_circ_0074533和hsa_circ_0089894。

在某些实施方案中，所述生物样品选自全血（例如，外周血），血清，血浆或脑脊液。

在某些实施方案中，所述生物样品选自全血（例如，外周血），血清和血浆。

在某些实施方案中，在进行步骤（2）之前，对所述生物样品进行预处理，以获得circRNAs；然后进行步骤（2），即，测定生物标志物的水平。对生物样品（例如全血，血清和血浆）进行处理以获得circRNAs的方法是本领域技术人员已知的。例如，可使用商业化的试剂盒（例如miRNeasy Serum Kit （Qiagen, USA）、Ribo-off rRNA Depletion Kit （Vazyme,Inc.））从生物样品（例如全血，血清和血浆）中分离获得circRNAs。

在某些实施方案中，在步骤（3）中，通过将所述生物标志物的水平与参考值进行比较，从而诊断受试者是否患阿尔茨海默病。