[发明专利]一种稳定性提高的普鲁兰酶突变体及其构建方法在审
| 申请号： | 202210987248.6 | 申请日： | 2022-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN115873832A | 公开（公告）日： | 2023-03-31 |
| 发明（设计）人： | 张显;饶志明;王志;胡孟凯;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/44 | 分类号： | C12N9/44;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/16;C12P19/12;C12P19/04;C12P19/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 稳定性 提高 普鲁兰酶 突变体 及其 构建 方法 | ||
1.一种普鲁兰酶突变体，其特征在于，是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的普鲁兰酶的第147位和/或第690位的氨基酸进行突变。
2.根据权利要求1所述的普鲁兰酶突变体，其特征在于，所述突变体为(a)、(b)或(c)：
(a)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的普鲁兰酶的第147位的天冬氨酸突变为苯丙氨酸；
(b)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的普鲁兰酶的第690位的甘氨酸突变为甲硫氨酸；
(c)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的普鲁兰酶的第147位天冬氨酸突变为苯丙氨酸，并将第690位的甘氨酸突变为甲硫氨酸。
3.编码权利要求1或2所述的普鲁兰酶突变体的基因。
4.携带权利要求3所述基因的重组载体。
5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，以pET-28a(+)作为表达载体。
6.携带权利要求3所述基因，或含有权利要求4或5所述重组载体的重组微生物细胞。
7.一种重组大肠杆菌，其特征在于，以pET-28a(+)作为表达载体，表达权利要求1或2所述的普鲁兰酶突变体。
8.根据权利要求7所述的重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主。
9.一种提高普鲁兰酶热稳定性的方法，其特征在于，将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的普鲁兰酶的第147位天冬氨酸突变为苯丙氨酸，和/或将第690位的甘氨酸突变为甲硫氨酸。
10.权利要求1或2所述突变体，或权利要求3所述基因，或权利要求4或5所述的重组载体，或权利要求6所述的重组微生物细胞，或权利要求7或8所述的重组大肠杆菌在水解淀粉生产低聚异麦芽糖中的应用。
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