[发明专利]一种基于数字PCR技术的5种病毒联合检测试剂盒在审
| 申请号： | 202210993287.7 | 申请日： | 2022-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN116064937A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 夏江;位玉玲 | 申请（专利权）人： | 领航基因科技（杭州）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 陆惠中 |
| 地址： | 310000 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 数字 pcr 技术 病毒 联合 检测 试剂盒 | ||
1.一种用于检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒的核酸组合，其特征在于：
检测H7N9的探针序列H7N9-P为5’-R1-CCCCGGATGTGCTC-Q1-3’；
检测狂犬病毒的探针序列RV-P为5’-R2-CTGACGATGTATGTTCC-Q2-3’；
检测尼帕病毒的探针序列Nip-P为5’-R3-CACCCTGGTCTCTG-Q3-3’，
检测流行性乙脑的探针序列JE-P为5’-R4-TGGACTGAAAACTGAAGC-Q4-3’，
检测汉坦病毒的探针序列Hant-P为5’-R5-CGGAAACCAAAACAT-Q5-3’；
内参探针IC-P序列为5’-R6-AGTTTGCGACATCTC-Q6-3’；
所述的R1-R6为荧光报告基团，Q1-Q6为荧光淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的核酸组合，其特征在于，R1-R6选自FAM、VIC、ROX、Cy5、A425或Cy5.5；Q1-Q6选自MGB、BHQ1或BHQ2。
3.根据权利要求1所述的核酸组合，其特征在于，相应的核酸探针的引物和内参探针的引物为：
H7N9-F：CTCGTGCGTACTGGAATGGA，H7N9-R：CGGGAGAGTTGATCCTTGCA；
RV-F：GCGCCGCCAAACTTGAT，RV-R：TTGCCGCCGCCAAAT；
Nip-F：ACGGCCTACGGATAACAGACA，Nip-R：TGGGCCTCGATGGTGATAAC；
JE-F：GCTGGACTGTGAGCCAAGGA，JE-R：CCCCACGGTCATGACGTAA；
Hant-F：TCGTTCGAGGATGTTAACGGTAT，Hant-R：GCATTTGGCAAGGACACGTA；
IC-F：CAGCGTGAAGCGCTTTTCA，IC-R：AACCACACTGCGCCAAGAG。
4.一种试剂盒，包括如权利要求1-3所述的核酸组合。
5.如权利要求4所述的试剂盒在检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒中的用途。
6.一种检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒的方法，其特征在于，使用如权利要求1-3所述核酸组合对样本进行数字PCR检测。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，每种引物的用量为100-300uM,每种探针的用量为100-300uM。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述数字PCR的扩增条件为：98℃预变性5min；循环内98℃变性15s、60℃复性1min，40个循环。
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