[发明专利]一种基于数字PCR技术的5种病毒联合检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于数字PCR技术的病毒联合检测试剂盒。本发明的原理是基于荧光探针法，针对靶基因设计特异性引物探针，检测5种病毒基因。本发明利用多重数字PCR体系解决同时检测一例样本中是否含H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒可检测到终浓度为100IU/mL的病毒核酸，灵敏度高。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，尤其涉及一种基于数字PCR技术的病毒联合检测试剂盒。

背景技术

H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒均为动物源人兽共患病，目前无同时检测上述病原体的荧光探针PCR技术。

发明内容

本发明基于荧光探针法，针对靶基因设计特异性引物探针，检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒这5种病毒基因。

本发明公开了一种用于检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒的核酸组合，其特征在于：

检测H7N9的探针序列H7N9-P为5’-R1-CCCCGGATGTGCTC-Q1-3’；

检测狂犬病毒的探针序列RV-P为5’-R2-CTGACGATGTATGTTCC-Q2-3’；

检测尼帕病毒的探针序列Nip-P为5’-R3-CACCCTGGTCTCTG-Q3-3’，

检测流行性乙脑的探针序列JE-P为5’-R4-TGGACTGAAAACTGAAGC-Q4-3’，

检测汉坦病毒的探针序列Hant-P为5’-R5-CGGAAACCAAAACAT-Q5-3’；

内参探针IC-P序列为5’-R6-AGTTTGCGACATCTC-Q6-3’；

所述的R1-R6为荧光报告基团，Q1-Q6为荧光淬灭基团。

优选地，R1-R6选自FAM、VIC、ROX、Cy5、A425或Cy5.5；Q1-Q6选自MGB、BHQ1 或BHQ2。

相应的核酸探针的引物和内参探针的引物为：

H7N9-F：CTCGTGCGTACTGGAATGGA，H7N9-R：CGGGAGAGTTGATCCTTGCA；

RV-F：GCGCCGCCAAACTTGAT，RV-R：TTGCCGCCGCCAAAT；

Nip-F：ACGGCCTACGGATAACAGACA，Nip-R：TGGGCCTCGATGGTGATAAC；

JE-F：GCTGGACTGTGAGCCAAGGA，JE-R：CCCCACGGTCATGACGTAA；

Hant-F：TCGTTCGAGGATGTTAACGGTAT，Hant-R：GCATTTGGCAAGGACACGTA；

IC-F：CAGCGTGAAGCGCTTTTCA，IC-R：AACCACACTGCGCCAAGAG。

本发明还公开了包括上述核酸组合(引物和探针)的试剂盒。

上述的试剂盒在检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒中的用途。

本发明公开了一种检测H7N9病毒、狂犬病毒、汉坦病毒、尼帕病毒、流行性乙型脑炎病毒的方法，其特征在于，使用如权利要求1-3所述核酸组合对样本进行数字PCR检测。

根据上述的方法，优选地，每种引物的用量为100-300uM,每种探针的用量为100-300 uM。