[发明专利]粮谷物及其制品中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量POCT检测方法

说明书

本发明公开了一种粮谷物及其制品中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量POCT检测方法，包括以下步骤：1）微球标记AFB1单克隆抗体；2）包被膜和结合垫的制备；3）时间分辨荧光免疫层析试纸条的组装4）检测取80μL的待测样本至检测卡加样孔中，计时反应15min；将检测卡插入荧光免疫层析读数仪，10s内读取待测样本浓度。本发明检测方法具有操作简单、快速、定量的检测优势。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种粮谷物及其制品中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量POCT检测方法。

背景技术

粮谷物在种植、收获、储存、加工过程中，会被来自空气传播或者虫害携带的产毒真菌污染，真菌在代谢过程中又会产生大量代谢毒物—真菌毒素。黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是黄曲霉菌和寄生曲霉菌等真菌中产生的一类天然真菌毒素，根据其化学结构与紫外线照射所发荧光的不同，可将黄曲霉毒素分为B1、B2、M1、M2、G1、G2等多种亚型，主要分布在玉米、花生、大米、小麦等农作物及其油类副产品中，奶制品、调味品中也有少量分布。在这些黄曲霉毒素中，黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1)被认为是最常见且最具危害性的毒素，其毒性约为氰化钾的10倍、砒霜的68倍、奶黄油的900倍、二甲基亚硝胺的75倍、三聚氰胺的416倍，被世界卫生组织认定为IA级危险物。

目前，尚无有效的方法去除受污染粮谷物中真菌毒素。因此，提供一种有效的检测方法加强真菌毒素监测，及时处理超标污染的粮谷物是避免黄曲霉毒素B1引起危害的重要途径。国内外已经广泛开发了许多用于黄曲霉毒素测定的分析方法，包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、薄层色谱法(TLC)、放射免疫法(PIA)、荧光偏振免疫法(FPIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、胶体金免疫层析法等。高效液相色谱、质谱联用、薄层色谱法等方法灵敏度高，可以提供定量及确证分析，但是前处理复杂，需要昂贵的仪器，且对操作人员有专业的要求，不适合基层使用。放射免疫法灵敏度高、特异性强，但是需要特殊设备，另外，放射性元素还会污染环境。荧光偏振免疫法操作简单快捷，适合大规模样品的快速检测。然而，这种方法的灵敏度低、检测范围狭窄、容易产生假阳性、仪器费用高。酶联免疫吸附测定法对于复杂基质试样可能会扰乱分析结果，导致检测结果出现假阳性亦或是假阴性。胶体金免疫层析法具有灵敏度高、特异性强、适用范围广、操作简便、快捷、成本低廉及现场适应能力强，但检测结果不能定量，临界显色判断时，不同人之间的主观判断存在差异。时间分辨荧光免疫层析技术是以包埋了稀土元素(铕)离子螯合物的荧光微球为免疫探针，在层析体系中通过竞争法进行的检测方法。利用其荧光衰变期长和发射光谱窄的特点可使有效信号与非特异性反应的背景荧光信号区分，减少非特异性荧光的干扰，灵敏度高于普通胶体金1-3个数量级，具有简单、快速、定量的检测优势。本发明建立了粮谷物及其制品中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量POCT检测方法，为其进一步推广使用提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种粮谷物及其制品中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量POCT检测方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种粮谷物及其制品中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量POCT检测方法，包括以下步骤：

1)微球标记AFB1单克隆抗体

取荧光聚苯乙烯微球加入BB缓冲液超声；之后先加入NHS混匀，再加入EDC避光混匀；室温下离心20min后，弃去上清，加入PBS缓冲液，超声，微球均匀分散至缓冲液中；加入AFB1单克隆抗体，避光混匀；加入BSA，再摇匀，离心20min，弃上清，加入TRIS溶解，2-8℃避光保存备用；

2)包被膜和结合垫的制备