[发明专利]用于32种病毒检测的引物组合和扩增子靶向测序方法在审
| 申请号： | 202210995452.2 | 申请日： | 2022-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN115992130A | 公开（公告）日： | 2023-04-21 |
| 发明（设计）人： | 易康;顾立江;夏美玲 | 申请（专利权）人： | 南京诺因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/6869;C12Q1/686;C12Q1/6806;C12R1/93 |
| 代理公司： | 合肥禾知知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34246 | 代理人： | 范名俊 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江北新区新锦湖路*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 32 病毒 检测 引物 组合 扩增 靶向 方法 | ||
1.用于32种病毒检测的引物组合，包括
上游引物F1：5’-GAACGACATGGCTACGATCCGACTT special F-3’
下游引物R1：5’-GACCGCTTGGCCTCCGACTT special R-3’，其中special F包括序列表中的序列1-126中的单数序列，special R包括序列表中的序列1-126中的双数序列。
2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于还包括：
随机引物N9：NNNNNNNNN。
3.根据权利要求1或2所述的引物组合，其特征在于还包括：
第二轮扩增上游通用引物
F2：5’-GAACGACATGGCTACGA-3’
第二轮扩增下游BC引物
R2-MGI_BC：5’-TGTGAGCCAAGGAGTTG
4.一种用于32种病毒检测的扩增子靶向测序方法，其特征在于其步骤包括：
(1)合成权利要求3所述的引物组合；
(2)提取待测样本中的RNA/DNA作为模板，加入上游引物F1、下游引物R1、随机引物N9进行一步RT-PCR法作为第一轮PCR扩增，以富集靶标区域；
(3)第一轮PCR扩增的产物经过磁珠纯化，作为第二轮PCR的模板，加入引物F2和R2-MGI_BC进行第二轮PCR扩增，每个样本的R2-MGI_BC中的barcode区域序列互不相同；
(4)第二轮PCR扩增的产物经磁珠纯化后，通过DNB一步法，使目标序列呈环状扩增，获得文库；
(5)将DNB产物加载到芯片上，进行高通量测序。
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