[发明专利]一种检测β-内酰胺类耐药基因PBPs的引物、方法和应用在审
| 申请号： | 202211001633.5 | 申请日： | 2022-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN115820884A | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 王淑一;陈雪青 | 申请（专利权）人： | 长沙艾迪康医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 黄素萍 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市芙蓉*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 内酰胺 耐药 基因 pbps 引物 方法 应用 | ||
1.一种检测β-内酰胺类耐药基因PBPs的引物，其特征在于，包括扩增PBP1，PBP2，PBP3基因的引物，其碱基序列为：
PBP1-F1：TGTAAAACGACGGCCAGTGATTTTTTATGGTTTTATCGTTTTATTTT
PBP1-R1：AACAGCTATGACCATGGCCATAATACCCATGCCCAA
PBP1-F2：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTTTTGGGCATGGGTATTATG
PBP1-R2：AACAGCTATGACCATGGTTGGTAATCCAAATCTATCGTGAG
PBP1-F3：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCACGATAGATTTGGATTACCAAC
PBP1-R3：AACAGCTATGACCATGTGYAAGGTTACAAGCCCTAAAA
PBP1-F4：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTAGGGCTTGTAACCTTRCA
PBP1-R4：AACAGCTATGACCATGGCATGGTGCCGTAATTAGAAAAT
PBP1-F5：TGTAAAACGACGGCCAGTATTTTCTAATTACGGCACCATGC
PBP1-R5：AACAGCTATGACCATGTATCCACGATTTCTTTACGCAAG
PBP2-F1：TGTAAAACGACGGCCAGTAACCCTTTTCAAAYTGGGCTT
PBP2-R1：AACAGCTATGACCATGGCTCACTTCAATGTTTARCCCTT
PBP2-F2：TGTAAAACGACGGCCAGTGGYTAAACATTGAAGTGAGCGG
PBP2-R2：AACAGCTATGACCATGTCAAATTCAAGYTTTCATAATCGC
PBP2-F3：TGTAAAACGACGGCCAGTAGCGATTATGAAARCTTGAATTTG
PBP2-R3：AACAGCTATGACCATGGAAAACACCGCATAAGCCCT
PBP2-F4：TGTAAAACGACGGCCAGTAGGGCTTATGCGGTGTTTTC
PBP2-R4：AACAGCTATGACCATGTTAAAAATRGGGGCTGCAAT
PBP3-F1：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGTTAAAAATCAAGAATACT
PBP3-R1：AACAGCTATGACCATGCTAAAGCGTTATTAGGGTAGTA
PBP3-F2：TGTAAAACGACGGCCAGTTACTACCCTAATAACGCTTTAG
PBP3-R2：AACAGCTATGACCATGCAAATTGTATTCAGGGTAACT
PBP3-F3：TGTAAAACGACGGCCAGTAAGTTACCCTGAATACAATTTGAACG
PBP3-R3：AACAGCTATGACCATGTTTCCCCAAAGCCCACTTC
PBP3-F4：TGTAAAACGACGGCCAGTGTTGATTTGCCGAATGAATTTG
PBP3-R4：AACAGCTATGACCATGCTACTAAAATRGTGATAGCGTATTTGGG。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括筛查样本是否有幽门螺杆菌感染的QPCR引物，其碱基序列为：
16S-F：CTGGAGAGACTAAGCCCTCC
16S-R：AGGATGAAGGTTTTAGGATT。
3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括检测PBPs基因的测序引物，其碱基序列为：
S1：TGTAAAACGACGGCCAGT
S2：AACAGCTATGACCATG。
4.一种检测β-内酰胺类耐药基因PBPs的方法，包括以下步骤：
(1)抽提胃粘膜石蜡组织的基因组DNA；
(2)用幽门螺杆菌的16S引物进行筛查，确定样本是否含有幽门螺杆菌；
(3)如果样本中有幽门螺杆菌，以步骤1中提取的DNA为模板进行PCR扩增；
其中扩增引物序列为：
PBP1-F1：TGTAAAACGACGGCCAGTGATTTTTTATGGTTTTATCGTTTTATTTT
PBP1-R1：AACAGCTATGACCATGGCCATAATACCCATGCCCAA
PBP1-F2：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTTTTGGGCATGGGTATTATG
PBP1-R2：AACAGCTATGACCATGGTTGGTAATCCAAATCTATCGTGAG
PBP1-F3：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCACGATAGATTTGGATTACCAAC
PBP1-R3：AACAGCTATGACCATGTGYAAGGTTACAAGCCCTAAAA
PBP1-F4：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTAGGGCTTGTAACCTTRCA
PBP1-R4：AACAGCTATGACCATGGCATGGTGCCGTAATTAGAAAAT
PBP1-F5：TGTAAAACGACGGCCAGTATTTTCTAATTACGGCACCATGC
PBP1-R5：AACAGCTATGACCATGTATCCACGATTTCTTTACGCAAG
PBP2-F1：TGTAAAACGACGGCCAGTAACCCTTTTCAAAYTGGGCTT
PBP2-R1：AACAGCTATGACCATGGCTCACTTCAATGTTTARCCCTT
PBP2-F2：TGTAAAACGACGGCCAGTGGYTAAACATTGAAGTGAGCGG
PBP2-R2：AACAGCTATGACCATGTCAAATTCAAGYTTTCATAATCGC
PBP2-F3：TGTAAAACGACGGCCAGTAGCGATTATGAAARCTTGAATTTG
PBP2-R3：AACAGCTATGACCATGGAAAACACCGCATAAGCCCT
PBP2-F4：TGTAAAACGACGGCCAGTAGGGCTTATGCGGTGTTTTC
PBP2-R4：AACAGCTATGACCATGTTAAAAATRGGGGCTGCAAT
PBP3-F1：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGTTAAAAATCAAGAATACT
PBP3-R1：AACAGCTATGACCATGCTAAAGCGTTATTAGGGTAGTA
PBP3-F2：TGTAAAACGACGGCCAGTTACTACCCTAATAACGCTTTAG
PBP3-R2：AACAGCTATGACCATGCAAATTGTATTCAGGGTAACT
PBP3-F3：TGTAAAACGACGGCCAGTAAGTTACCCTGAATACAATTTGAACG
PBP3-R3：AACAGCTATGACCATGTTTCCCCAAAGCCCACTTC
PBP3-F4：TGTAAAACGACGGCCAGTGTTGATTTGCCGAATGAATTTG
PBP3-R4：AACAGCTATGACCATGCTACTAAAATRGTGATAGCGTATTTGGG(4)对步骤3中的扩增产物进行测序；其中测序引物序列为：
S1-TGTAAAACGACGGCCAGT
S2-AACAGCTATGACCATG
(5)将测序结果与标准序列进行比对，确定PBPs的突变情况。
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