[发明专利]一种从青枯菌中筛选抗青枯病的胞外核酸酶的方法及遗传改良应用在审
| 申请号： | 202211004364.8 | 申请日： | 2022-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN116334036A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 李博;杜鑫雅;于晓;付艳苹;姜道宏;谢甲涛;程家森 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/82;C12N15/55;A01H5/00;A01H6/82;A01H6/20;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 青枯菌中 筛选 抗青枯病 核酸酶 方法 遗传 改良 应用 | ||
1.一种从青枯菌中筛选抗青枯病的胞外核酸酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：从青枯菌基因组中筛选与胞外类Holliday Junction结构相关的结合蛋白，得核酸酶；
敲除青枯菌基因组中所述核酸酶的基因，当基因敲除菌的表型发生变化且致病力降低，与野生型菌株的竞争力减弱时，所述核酸酶即为所述抗青枯病的胞外核酸酶RuvC。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述青枯菌基因组包括青枯菌模式菌株GMI1000基因组。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述敲除的方法包括自然转化法。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，筛选得到所述胞外核酸酶RuvC后，还包括将体外纯化的所述胞外核酸酶RuvC与生物膜混合，验证所述胞外核酸酶RuvC对生物膜的抑制作用。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述胞外核酸酶RuvC的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
6.利用权利要求1～5任一项所述方法筛选得到的抗青枯病的胞外核酸酶的编码基因RuvC在构建抗青枯菌物种中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述构建抗青枯菌物种的方法包括遗传转化。
8.根据权利要求6或7所述应用，其特征在于，所述抗青枯菌物种包括抗青枯菌的植物和微生物。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述植物来源于十字花科和茄科。
10.一种构建抗青枯菌物种的方法，其特征在于，包括将抗青枯病的胞外核酸酶的编码基因RuvC、表达盒或表达载体转化入目标物种中，构建得到所述抗青枯菌物种；
所述将抗青枯病的胞外核酸酶通过权利要求1～5任一项所述方法筛选得到。
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