[发明专利]一种用于快速检测沙门氏菌的扩增引物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于快速检测沙门氏菌的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物基于基于沙门氏菌bcfC基因特异性保守区域设计，包括正向引物bcf-F和反向引物bcf-R，所述正向引物bcf-F序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物bcf-R序列如SEQ ID NO：2。

2.根据权利要求1所述的用于快速检测沙门氏菌的扩增引物，其特征在于，所述正向和反向引物的5’或3’端均可标记标记物，所述标记物包括磷酸化、生物素、地高辛、氨基、羧基、巯基或引物可修饰荧光基团，使扩增后的DNA双链产物两端含有不同的标记物。

3.根据权利要求2所述的用于快速检测沙门氏菌的扩增引物，其特征在于，所述标记物标记在正向引物bcf-F或反向引物bcf-R的5’端。

4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的用于快速检测沙门氏菌的扩增引物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括石墨烯、扩增缓冲液、Bst DNA聚合酶、dNTPs、聚乙二醇、甜菜碱、无酶水、阳性对照和阴性对照。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述石墨烯包括氧化石墨烯、还原石墨烯、石墨烯量子点或功能化改性的石墨烯。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中正向引物bcf-F与反向引物bcf-R摩尔比为1:1～1:2，所述正向引物bcf-F和反向引物bcf-R的浓度均为0.1～30μM。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光免疫层析试纸和运行缓冲液，所述运行缓冲液中包括0.001～1M的三羟甲基氨基甲烷、0.001～0.5M乙二胺四乙酸和0.001～0.8M氯化钠。

9.一种快速检测沙门氏菌的方法，其特征在于，所述检测方法是利用权利要求1-3任一项所述的用于快速检测沙门氏菌的扩增引物或权利要求4-8任一项所述的试剂盒，采用荧光检测方法进行检测沙门氏菌。

10.根据权利要求10所述的快速检测沙门氏菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在待测液中加入权利要求1-3任一项所述的用于快速检测沙门氏菌的扩增引物或权利要求4-8任一项所述的试剂盒进行扩增反应，扩增反应结束后，向反应管中加入运行缓冲液，吹打混匀，静置，通过荧光分析仪读取数值。若荧光信号值大于122，则说明待检样品中含有沙门氏菌；若荧光信号值小于等于122，则说明待检样品中没有沙门氏菌。

11.根据权利要求9所述的快速检测沙门氏菌的方法，其特征在于，进行扩增分析反应时，扩增引物的反应温度为两步温度快速循环，所述第一步温度为辅助变性温度，范围为70～78℃，第二步温度为扩增反应温度，范围为55～70℃，每步温度反应时间均为1～10秒，循环数为35～45。