[发明专利]一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法在审
| 申请号： | 202211010605.X | 申请日： | 2022-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN116179482A | 公开（公告）日： | 2023-05-30 |
| 发明（设计）人： | 孙涛;余莹莹;徐鹏飞;邓芸芸 | 申请（专利权）人： | 杭州艾沐蒽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0781 | 分类号： | C12N5/0781;C12Q1/6869;C40B30/04 |
| 代理公司： | 杭州润涞知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 33358 | 代理人： | 李磊 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市江干区红*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通量 筛选 抗原 特异性 抗体 ig 序列 方法 | ||
1.一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：
(1)B细胞扩增，预留部分扩增细胞作为对照进行筛选并进行高通量测序；
(2)对剩余B细胞进行相应单一抗原或多抗原组合体外刺激；
(3)对刺激后的B细胞进行分选获得相应抗原特异性抗体表达的B细胞；
(4)对分选后的B细胞进行单细胞BCR高通量测序，分析并获得相应抗原肽刺激的Ig序列库。
2.根据权利要求1所述的一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法，其特征在于：所述高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法包括对于未知病原和已知病原的抗原特异性抗体Ig序列的筛选。
3.根据权利要求2所述的一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法，其特征在于：所述对于未知病原的抗原特异性抗体Ig序列筛选的具体方式为从发病或已感染过的患者外周血样本中进行分离PBMC，经过HASI细胞培养技术平台培养扩增记忆B细胞，再通过患者相应的抗原多肽制备体外诱导B细胞扩增，获得相应抗原特异性抗体表达的B细胞进行高通量测序，通过生信分析获得潜在的抗原特异性的抗体表达序列。
4.根据权利要求2所述的一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法，其特征在于：所述对于已知病原的抗原特异性抗体Ig序列筛选的具体方式为根据数据库信息获得大量抗原多肽或新生抗原多肽，结合HASI细胞培养技术进行体外诱导刺激B淋巴细胞，筛选大量特异性抗体表达的B细胞并进行相应的单细胞BCR高通量测序，通过生信分析获得潜在的抗原特异性的抗体表达序列。
5.根据权利要求1所述的一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法，其特征在于：所述步骤(2)中抗原为相应的病毒抗原多肽或不同疾病的抗原肽组合。
6.根据权利要求2所述的一种高通量测序筛选抗原特异性抗体Ig序列的方法，其特征在于：对于未知病原的抗原特异性的抗体表达序列检测，在B细胞扩增和体外刺激过程中筛选出CD19+CD27-CD23+B细胞、CD27+CD38-B细胞进行高通量测序；对于已知病原的抗原特异性的抗体表达序列检测，在B细胞扩增和体外刺激过程中筛选出CD40+CD38-CD27B细胞进行高通量测序。
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