[发明专利]一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法

权利要求书

1.一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、制备猪人工胃液：2g氯化钠，3.2g胃蛋白酶，溶于适量的超纯水中，加入7ml 36.5％HCL，超纯水定容至1000ml，用0.1mol/L NaOH调pH至3.0；

S2、制备猪人工肠液：将6.8克KH₂PO₄溶解在500ml水中，0.1mol/L Na OH调pH至6.8，加入10克胰蛋白酶，3克胆汁盐，加水定容至1000ml，用0.1mol/L NaOH和36.5％HCL调节pH为6.8；

S3、选择母猪配合饲料500g，粉碎至30目，充分混合均匀；

S4、检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量，其中黄曲霉毒素B1为AFB1，玉米赤霉烯酮为ZEN，脱氧雪腐镰刀菌烯醇为DON；

S5、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入AFB1标准品，将2份样品中AFB1浓度均调整为20ppb，对照组和实验组各1份；

实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；

两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中AFB1含量；

S6、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入ZEN标准品，将2份样品中ZEN浓度均调整为1000ppb，对照组和实验组各1份；

实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；

两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中ZEN含量；

S7、称取2份步骤S3得到的样品，10g/份，各自加入DON标准品，将2份样品中DON浓度均调整为3000ppb，对照组和实验组各1份；

实验组加入0.01g脱毒剂产品，对照组加入0.01g纯水；

两组分别加30ml猪人工胃液，置于恒温摇床，38℃，200rpm，孵育2h，再加入45ml猪人工肠液，并调pH至6.5，38℃，200rpm，孵育2h；12000转离心5min，上清液过0.22μm滤膜，用高效液相色谱仪检测上清液中DON含量。

2.权利要求1所述的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：所述步骤S4中，检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量具体方法参照《GB/T 36858-2018饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法》、《GB/T 28716-2012饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》、《GB/T 30956-2014饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化－高效液相色谱法》。

3.权利要求1所述的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：所述步骤S5中，AFB1去除率＝(对照组上清液AFB1含量-实验组上清液AFB1含量)/对照组上清液AFB1含量。

4.权利要求1所述的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：所述步骤S6中，ZEN去除率＝(对照组上清液ZEN含量-实验组上清液ZEN含量)/对照组上清液ZEN含量。

5.权利要求1所述的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：所述步骤S7中，DON去除率＝(对照组上清液DON含量-实验组上清液DON含量)/对照组上清液DON含量。