[发明专利]一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法

说明书

本发明公开了一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，包括如下步骤：S1、制备猪人工胃液；S2、制备猪人工肠液；S3、选择母猪配合饲料500g，粉碎至30目，充分混合均匀；S4、检测配合饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇三个毒素含量；S5、用高效液相色谱仪检测上清液中AFB1含量；S6、用高效液相色谱仪检测上清液中ZEN含量；S7、用高效液相色谱仪检测上清液中DON含量。本发明提出的霉菌毒素脱毒剂评价方法，考虑了饲料复杂成分、消化酶、胆汁等的干扰，更接近脱毒剂产品在动物体内实际应用场景。本发明提出的霉菌毒素脱毒剂评价方法，可以帮助技术人员在实验室初步筛选更有价值的产品，不用完全依赖动物实验。

技术领域

本发明属于评价饲用霉菌毒素脱毒剂有效性技术领域，更具体地说，尤其涉及一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法。

背景技术

霉菌毒素(Mycotoxin)是由各类相应的真菌所分泌的有毒代谢产物，目前发现的霉菌毒素已经超过了800种，其中关注度最高的是黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉毒素等。据世界粮农组织(FAO) 估计，全世界每年超过25％的农作物会受到霉菌毒素的侵害，给人类造成了巨大的经济损失和粮食浪费。由于大多数污染粮食流通到饲料行业，给畜禽养殖带来严重的影响，使养殖效益低下。

饲料脱毒技术的研究和脱毒剂产品的使用，国外开始相对较早。直至2003 年和2004年，中国饲料厂使用的玉米和其它原料中霉菌毒素含量严重超标，造成畜牧行业频繁的疾病暴发，其后，霉菌毒素的危害和脱毒剂的必要性才开始引起了人们的重视。在过去的十年里，中国的脱毒剂市场需求飙升，国内外脱毒剂产品大量出现。目前，市场上脱毒剂产品鱼龙混杂，超过200种脱毒剂产品，其中包括国内外的著名品牌和中小型兽药企业生产的产品。由于霉菌毒素本身化学结构的复杂性，以及吸附剂产品的多样性，世界各国对饲料脱毒剂类产品的有效性评价方法还没有达成共识，针对此类产品管理的法律、法规和标准还不完善，而脱毒剂产品在饲料养殖市场上呈现快速增长势头，因此造成产品质量良莠不齐，市场竞争无序，行业急需规范。

目前，饲用脱毒剂产品普遍使用的体外评价方法是在一定pH的缓冲液中加入适量毒素标准品和脱毒剂产品，在适宜的温度孵育一定时间后，离心，然后检测上清液中毒素残留量，根据毒素添加量与残留量相差值，评价脱毒剂对该毒素的去除能力。但实际上，脱毒剂产品发挥作用的场所是动物胃肠道，胃肠道是一个非常复杂的环境，有消化酶、饲料成分等很多其他干扰物质。然而，这个方法是相对简单的反应环境，存在很多不合理的地方，不能真实的反应脱毒剂在动物体内的应用效果。因此，开发一种更加科学、更接近动物体内环境的体外评价方法，有利于在体外更真实的评价霉菌毒素脱毒剂产品的有效性。

本发明的目的在于针对现有脱毒剂体外评价方法的不足，提供一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，更加真实的评价脱毒剂产品的效果。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种模拟猪消化饲用霉菌毒素脱毒剂有效性的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、制备猪人工胃液：2g氯化钠，3.2g胃蛋白酶，溶于适量的超纯水中，加入7ml36.5％HCL，超纯水定容至1000ml，用0.1mol/L NaOH调pH至3.0；

S2、制备猪人工肠液：将6.8克KH₂PO₄溶解在500ml水中，0.1mol/L Na OH调pH至6.8，加入10克胰蛋白酶，3克胆汁盐，加水定容至1000ml，用0. 1mol/L NaOH和36.5％HCL调节pH为6.8；

S3、选择母猪配合饲料500g，粉碎至30目，充分混合均匀；