[发明专利]一种辅助诊断结核病的抗原组合及其应用和试剂盒

权利要求书

1.一组辅助诊断结核病的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括38KD-MPT32-MPT64和CFP10-Mtb81-EspC和Ag85B-HBHA；

所述融合蛋白38KD-MPT32-MPT64的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或是与SEQ IDNO.1具有90％以上同源性的序列；

所述融合蛋白CFP10-Mtb81-EspC的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，或是与SEQ IDNO.2具有90％以上同源性的序列；

所述融合蛋白Ag85B-HBHA的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或是与SEQ ID NO.3具有90％以上同源性的序列。

2.一种辅助诊断结核病的抗原组合，其特征在于，所述抗原组合至少包括权利要求1中所述的38KD-MPT32-MPT64和CFP10-Mtb81-EspC融合蛋白，以及抗原LAM。

3.根据权利要求2所述的抗原组合，其特征在于，所述抗原组合还包括权利要求1中所述的融合蛋白Ag85B-HBHA。

4.根据权利要求3所述的抗原组合，其特征在于，所述抗原组合中融合蛋白的制备方法包括：通过基因合成技术合成了融合蛋白编码基因序列，蛋白之间通过多肽(GGGSGGGS)连接，然后在两端插入酶切位点：38KD-MPT32-MPT64(NdeI/XhoI)、CFP10-Mtb81-EspC(BamHI/XhoI)和Ag85B-HBHA(BamHI/XhoI)，并加入标签，连接转化后获得原核表达载体，经过转染后，诱导所述融合蛋白表达，再经过纯化浓缩后获得所述融合蛋白。

5.编码如权利要求2-4任一项所述的抗原组合的DNA分子。

6.含有如权利要求5所述的DNA分子的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括pET-30a-38KD-MPT32-MPT64、pET21a-CFP10-Mtb81-EspC和pET21a-Ag85B-HBHA；

所述重组表达载体中融合蛋白38KD-MPT32-MPT64的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述重组表达载体中融合蛋白CFP10-Mtb81-EspC的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述重组表达载体中融合蛋白Ag85B-HBHA的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

7.含有如权利要求6所述的重组表达载体的转基因细胞系或者重组菌。

8.如权利要求2-4任一项所述的抗原组合用于制备结核病血清学诊断试剂中的应用，其特征在于，所述结核病包括肺结核、肺外结核、菌阴肺结核和GeneXpert MTB/RIF检测阴性结核病。

9.一种辅助诊断结核病的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的抗原组合。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测样本选自血清、血浆、胸腔积液或脑脊液中的任意一种。