[发明专利]一种辅助诊断结核病的抗原组合及其应用和试剂盒

说明书

本发明公开了一组辅助诊断结核病的融合蛋白，其包括38KD‑MPT32‑MPT64、CFP10‑Mtb81‑EspC和Ag85B‑HBHA融合蛋白。上述融合蛋白组合可用于结核病患者体液中抗原特异性结核抗体的检测，对辅助诊断结核病具有较高敏感性、特异性和低成本特点。同时，本发明提供的新的抗原组合可为结核病的诊断和治疗提供科学参考。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种辅助诊断结核病的抗原组合及其应用和试剂盒。

背景技术

结核病(tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)感染引起的一种传染性疾病，对人类健康仍然产生重要威胁。在2016-2019年，结核病是导致单一传染性微生物死亡的主要原因。此外，据估计，世界上约有23％的人口患有潜伏性结核感染(LTBI)，因此在其一生中面临发展为活动性结核病的风险。卡介苗(BacilleCalmette-Guerin， BCG)是唯一批准用于临床的结核病疫苗，可预防幼儿的播散性结核病，但不能为青少年和成人提供持续的结核病保护。活动性结核病的早期和准确诊断对于结核病的防控至关重要，早期鉴定Mtb细菌或其成分可以为快速诊断提供直接证据。

用于诊断结核病的方法包括结核菌素皮肤试验(TST)、痰涂片和培养试验、胸部X线(CXR)、干扰素-γ释放试验(IGRA)和核酸扩增试验等。TST和CXR辅助诊断结核病特异性不高。痰涂片镜检鉴定抗酸杆菌仍然是结核病最常用的检测方法，但其敏感性较低。尽管结核病的诊断金标准是细菌培养，但它是一种耗时的、基于实验室的检测方法。GeneXpertMTB/RIF(以下简称Xpert)和Xpert MTB/RIF Ultra检测均通过同时检测肺结核患者的Mtb复合物和利福平耐药性来诊断活动性TB，具有高灵敏度和特异性；然而两者方法都相对昂贵并且需要设备技术投资。血清学诊断有其固有优势，如操作简便、快速、便于推广、无需特殊精密仪器等，已有多种纯化的抗原可应用，尤其对痰培养阴性和肺外结核病有重要的辅助诊断价值。然而应用单一抗原很难达到足够的敏感度和特异性。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种辅助诊断结核病的抗原组合及其应用和试剂盒，以提高结核病辅助诊断的敏感性和特异性。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一组辅助诊断结核病的融合蛋白，其包括 38KD-MPT32-MPT64和CFP10-Mtb81-EspC和Ag85B-HBHA；

融合蛋白38KD-MPT32-MPT64的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或是与SEQ IDNO.1具有90％以上同源性的序列；

融合蛋白CFP10-Mtb81-EspC的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，或是与SEQ IDNO.2具有90％以上同源性的序列；

融合蛋白Ag85B-HBHA的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或是与SEQ ID NO.3具有90％以上同源性的序列。

第二方面，本发明提供了一种辅助诊断结核病的抗原组合，包括上述的融合蛋白38KD-MPT32-MPT64和CFP10-Mtb81-EspC，以及抗原LAM。

第三方面，本发明提供了一种编码上述抗原组合的DNA分子。

第四方面，本发明提供了一种含有上述的DNA分子的重组表达载体，其包括pET-30a-38KD-MPT32-MPT64、pET21a-CFP10-Mtb81-EspC和 pET21a-Ag85B-HBHA；

重组表达载体中融合蛋白38KD-MPT32-MPT64的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；