[发明专利]靶向STAT3蛋白Ser701磷酸化的抗原肽、抗体及其应用

说明书

本申请公开了靶向STAT3蛋白Ser701磷酸化的抗原肽及其应用。该抗原肽具有与SEQ ID NO.1～4所示的氨基酸序列、或与该序列具有相同功能的同源序列。应用该抗原肽制备的抗体能检测出细胞和组织中的STAT3蛋白Ser701磷酸化水平，有助于研究STAT3蛋白Ser701磷酸化的分子机制和生物学功能；为研究STAT3在细胞周期进展、自噬、凋亡、代谢、炎症、侵袭和血管生成等细胞信号通路中的作用提供帮助。本申请中提供了一种STAT3蛋白Ser701磷酸化抗体的制备方法，该方法操作简单，通过此方法制得的抗体特异性强、纯度高、稳定性好。

技术领域

本申请属于STAT3蛋白磷酸化检测技术领域，本申请公开了靶向STAT3蛋白Ser701磷酸化的抗原肽及其应用，具体而言涉及能够将肽作为抗原，制备靶向识别STAT3蛋白Ser701磷酸化的抗体及其作为检测STAT3蛋白Ser701磷酸化水平的应用。

背景技术

信号传导及转录激活蛋白(signal transducer and activator oftranscription，STAT)是一种具有DNA结合活性的蛋白，包括STAT1～6，其中，STAT3蛋白是STAT家族中最重要的成员之一，作为一个显著的核转录因子，其与超过1000个基因产物的表达有关。

STAT3蛋白在结构上可分为以下几个功能区段：N-末端结构域、DNA结合域、卷曲螺旋结构域、SH2结构域、C-末端转录激活结构域，其中SH2结构域是最保守也是对其功能最重要的区段。通过位于SH2和C端的转录激活结构域之间的保守Tyr705残基的磷酸化，从而介导2个STAT3分子之间的相互作用，形成同源二聚体。

蛋白质翻译后修饰对STAT3蛋白的活性调控至关重要，而磷酸化修饰为最主要的一种。STAT3 Tyr705位点磷酸化可被多种细胞因子和生长因子激活，包括利用IL-6信号转导受体链gp130(如白介素-6、抗癌素M、白介素-11)或同二聚体细胞因子受体(如粒细胞集落刺激因子，G-CSF)，以及通过蛋白酪氨酸激酶受体(如表皮生长因子，EGF)起作用。细胞因子与受体结合后，激活受体复合物上的特定位点酪氨酸残基磷酸化，STAT3蛋白的SH2结构域与特异性受体磷酸酪氨酸序列相互作用，将STAT3蛋白招募到受体信号复合物中，使STAT3蛋白的Tyr705残基磷酸化并从细胞膜上脱落。Tyr705磷酸化的STAT3在细胞质内形成具有DNA结合活性的同源二聚体，可以转移至细胞核内，与靶基因启动子序列的特定位点结合，参与靶基因的转录调控。此外，Ser727位点发生磷酸化可使STAT3转位至线粒体，能够进入线粒体与mtDNA结合调节基因转录表达，并且能增加缺血损伤下电子传递链复合酶活性，降低ROS的产生，增加ATP的生成，减少组织损伤。

发明内容

本申请发明人通过对STAT3蛋白结构进行深入研究，发现其第701位氨基酸Ser存在发生磷酸化的可能，而该位置若发生磷酸化可能对STAT3蛋白的经典信号通路激活产生影响。因此，发掘有效检测STAT3蛋白第701位丝氨酸磷酸化的相关技术和方法，对探索STAT3 Ser701磷酸化在细胞内的机制以及在动物体和人体内的生物学功能及相关药物开发等方面具有积极意义。为此，本申请实施例至少公开了以下技术方案：

第一方面，本申请实施例公开了一种抗原肽，所述抗原肽是模拟STAT3蛋白Ser701磷酸化的肽或其功能片段。该肽或其功能片段能够在体内产生免疫应答，进而产生一种能够特异性结合STAT3第701位丝氨酸磷酸化的抗体，从而利用该抗体能够有效检测细胞中STAT3蛋白的Ser701位点磷酸化水平，可以间接探究细胞生长、增殖、代谢、炎症等生物学过程。

所述抗原肽具有靶向STAT3蛋白的Ser701磷酸化位点的免疫原性，其中，所述抗原肽为(I)～(IV)中的至少一项：

(I).SEQ ID NO.1～4所示的氨基酸序列；

(II).与(I)所述序列至少有75％相似性的氨基酸序列；