[发明专利]含有膜表面结构域的多肽及其用途

说明书

本发明涉及含有膜表面结构域的多肽及其用途。具体地，本发明提供一种工程改造的多肽，其包括膜表面结构域，所述膜表面结构域包括B细胞表面抗原的胞外结构域或其变体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种多肽构建体及其应用。

背景技术

肿瘤免疫细胞治疗现在在肿瘤治疗中已经占据着越来越重要的地位。目前已有多种效应免疫细胞，即杀伤性免疫细胞用于临床治疗，主要包括CAR-T细胞、TCR-T细胞、自然杀伤细胞(nature killer，NK)、CAR-NK细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineactivated killer cells，CIK)、树突状细胞刺激的细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、γδT细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)等。对天然的效应免疫细胞进行改造，导入过表达外源基因如CAR、TCR或其他跨膜分子编码基因或分泌型分子(如细胞因子、抗体等)编码基因是目前增强免疫效应细胞抗肿瘤效应、提升免疫细胞治疗效果的重要手段。由此引发的中靶脱瘤(on target/off tumor)效应引起的细胞因子释放综合征(CRS)这一不良反应仍然是免疫细胞治疗的潜在重要风险。为解决这一问题，通常采用的手段是在免疫效应细胞中引入分子刹车元件，以期在发生不良反应时能够及时清除表达分子刹车元件的免疫效应细胞，进而提高安全性。目前已报道的分子刹车元件主要包括代谢型自杀基因HSV-TK系统、凋亡基因iCasp9系统。CN109750067A和CN109750066A还公开了一种包括免疫抑制性抗体与tEGFR的融合蛋白，其可通过在使用中施用靶向EGFR的抗体药物如西妥昔单抗，通过ADCC、ADCP与CDC清除免疫效应细胞。

此外，对于过表达外源基因的免疫效应细胞，如何检测外源基因表达阳性的细胞，以及如何分选外源基因表达的细胞，目前仍然缺少比较有效的手段。对于表达产物为膜表面蛋白或跨膜蛋白的外源基因，针对不同的表达产物的胞外结构域，需要设计不同的检测体系和分选方法对这些外源基因表达阳性的细胞进行检测和/或分选，增加了检测和分选操作上的复杂度及检测结果一致性比较的难度。对于表达产物为分泌型蛋白或多肽的外源基因，如细胞因子和抗体，则仍然尚无特别好的方法对这些外源基因表达阳性的细胞进行检测和/或分选。

目前仍需要一种能够具有通用性的多肽分子标签，在具有分子刹车元件功能的同时还能够同时兼顾充当外源基因表达的检测和分选标签并充当不同结构域之间的接头。这将对细胞治疗产品的生产质量控制及潜在的临床应用具有非常重要的意义。

发明内容

本发明提供一种工程改造的多肽，其包括膜表面结构域，所述膜表面结构域包括B细胞表面抗原的胞外结构域或其变体。

在一个或多个实施方案中，B细胞表面抗原是BCMA，所述B细胞表面抗原的胞外结构域或其变体为BCMA胞外结构域或其变体。

在一个或多个实施方案中，所述多肽还包括跨膜区。所述膜表面结构域位于跨膜区的N端方向。

在一个或多个实施方案中，所述膜表面结构域与所述跨膜区通过铰链区或接头连接。所述接头例如是软性接头或刚性接头；优选地，所述刚性接头的氨基酸序列如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:53中任一项所示。

在一个或多个实施方案中，所述多肽还包括位于膜表面结构域N端或C端的胞外识别区域；优选地，所述膜表面结构域和所述胞外识别区域通过铰链区或接头连接。所述胞外识别区域选自以下一种或多种：嵌合抗原受体的抗原结合区、膜表面细胞因子的细胞因子区、或信号转换受体的信号胞外区。

在一个或多个实施方案中，所述接头是软性接头或刚性接头或多重表达接头。

在一个或多个实施方案中，所述接头是刚性接头。