[发明专利]一种十足目虹彩病毒1的单域抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了十足目虹彩病毒1的单域抗体及其制备方法和应用；所述单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，基因序列如SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4所示；同时本发明还提供一种十足目虹彩病毒1的单域抗体的制备方法，以成年健康的条纹斑竹鲨作为免疫对象，采用DIV1为抗原进行免疫；通过分离免疫条纹斑竹鲨外周血淋巴细胞，提取总RNA，再反转录为cDNA；以cDNA为模板，扩增条纹斑竹鲨vNAR片段，与载体连接构建噬菌体文库；从噬菌体文库中淘选识别DIV1的阳性克隆；构建表达载体，诱导表达DIV1单域抗体，最终获得十足目虹彩病毒1的单域抗体；本发明还将十足目虹彩病毒1的单域抗体用于检测十足目虹彩病毒1。

技术领域

本发明属于分子免疫学和病原生物学交叉技术领域，具体涉及一种十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus 1，DIV1)的单域抗体及其制备方法和应用。

背景技术

虾虹彩病毒病是一种急性、传染性疾病，其病原为虹彩病毒科的一个新属即十足目虹彩病毒属的十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus 1，DIV1)。DIV1是一种具有线性双链DNA的胞浆型病毒，病毒在斜射光的照射下会出现虹彩现象，因而被称为虹彩病毒。DIV1对于甲壳动物的致死率可高达100％。对虾感染DIV1后变现为肝胰腺颜色变浅、空肠空胃和甲壳变软，可在短期内引起大面积死亡。近年来，十足目虹彩病毒病在我国多数沿海虾养殖区均有爆发，危害波及凡纳滨对虾、中国明对虾、脊尾白虾、日本沼虾和罗氏沼虾等众多品种，每年造成经济损失达数亿美元，严重危害虾类养殖产业健康发展。

目前，针对十足目虹彩病毒1尚无有效的防治措施，实现该病的早期诊断是亟待解决的问题。现有鉴定DIV1感染的方法主要有PCR检测和原位杂交；公开号为CN114717358A的中国专利公开了“一种用于同时检测虾肝肠胞虫、十足目虹彩病毒1的双重PCR检测方法及试剂盒”，其中具体公开的检测方法对检测的病原基因片段无需再进行克隆、测序和序列比对，一次实验即可检测出待测样品中是否含有这2种病原中的一种或两种；公开号为CN111218530A的中国专利公开了“荧光定量PCR检测十足目虹彩病毒1的引物组及试剂盒”，其中具体公开了根据DIV1的MCP基因保守序列设计特异性的引物及TaqMan-MGB探针和试剂盒，制备了重组质粒标准品pMD18-T-MCPDIV1，建立了检测DIV1的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法。但是上述分子生物学检测方法对技术要求较高，依赖于基层实验室的建立，难以实现“池边检测”，因而难以在养殖生产中推广应用。

研制病毒的单克隆抗体，利用免疫学检测技术开发现场检测产品是实现十足目虹彩病毒1早期诊断的有效途径。近年来，免疫学检测在虾病原检测方面进展较大，已实现数种虾重大病害的早期检测，如白斑综合征、急性肝胰腺坏死病等。目前，尚无虾虹彩病毒DIV1单克隆抗体研制的报道。

发明内容

为满足“池边检测”的养殖需求，解决现有技术中的十足目虹彩病毒1检测复杂的问题，本发明创造性地提出一种十足目虹彩病毒1的单域抗体及其制备方法和应用，通过本发明制备得到的单域抗体能够特异性地识别DIV1病毒，具有很好的灵敏度和准确性，为建立虾虹彩病毒病的早期诊断技术以及防治药物的研究提供新的思路。

本发明的技术方案如下：

本发明提供一种十足目虹彩病毒1的单域抗体，所述单域抗体的氨基酸序列如SEQID NO:1或SEQ ID NO:2所示。

进一步的，所述单域抗体的基因序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示。

本发明还提供一种十足目虹彩病毒1的单域抗体的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)以成年健康的条纹斑竹鲨作为免疫对象，采用DIV1为抗原进行免疫；