[发明专利]双特异性抗体修饰囊泡、双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、方法和应用

权利要求书

1.一种双特异性抗体(BsAb)修饰囊泡，其特征在于，包括囊泡和结合于所述囊泡表面的双特异性抗体；

其中，所述双特异性抗体与所述囊泡表面的膜结构相结合；所述双特异性抗体包括第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域；所述第一抗原结合结构域为CD19抗原结合结构域或HER2抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域为CD3抗原结合结构域。

2.如权利要求1所述双特异性抗体修饰囊泡，其特征在于，所述双特异性抗体在所述囊泡表面的结合密度为每平方微米囊泡表面结合的AsAb的平均数量大于100个；和/或，所述双特异性抗体修饰囊泡的直径为80～1000nm，优选平均直径为100～200nm。

3.如权利要求2所述双特异性抗体修饰囊泡，其特征在于，任一种所述双特异性抗体独立地为BiTE抗体。

4.如权利要求1～3中任一项所述双特异性抗体修饰囊泡，其特征在于，任一种所述双特异性抗体独立地包括依次串联的所述第一抗原结合结构域、连接肽、所述第二抗原结合结构域、铰链区和跨膜结构域；其中，所述跨膜结构域嵌入到所述囊泡表面的磷脂双分子层中而结合。

5.如权利要求4所述双特异性抗体修饰囊泡，其特征在于，所述双特异性抗体修饰囊泡满足如下的任意一个特征、任意多个部分特征或全部特征：

(a1)所述第一抗原结合结构域包含氨基酸序列如SEQ ID No.:1所示的抗CD19单链抗体可变区，或者，包含氨基酸序列如SEQ ID No.:2所示的抗HER2单链抗体可变区；

(a2)所述所第二抗原结合结构域包含氨基酸序列如SEQ ID No.:3所示的抗CD3单链抗体可变区；

(a3)所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No.:4所示；

(a4)所述铰链区的氨基酸序列如SEQ ID No.:5所示；和

(a5)所述跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.:6所示。

6.如权利要求1～3中任一项所述双特异性抗体修饰囊泡，其特征在于，所述囊泡来源于哺乳动物细胞和昆虫细胞中的一种或多种。

7.如权利要求6所述双特异性抗体修饰囊泡，其特征在于，所述囊泡来源于HEK-293T细胞、Nalm6细胞和RAW264.7细胞中的一种或多种。

8.一种双特异性抗体，其特征在于，如权利要求1～5中任一项所定义。

9.一种核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列包括以下至少一组中的核苷酸序列：

(i)编码权利要求8所述双特异性抗体的核苷酸序列；和

(ii)与(i)中所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列；

优选地，所述核酸为DNA、mRNA或者其组合。

10.如权利要求9所述核酸，其特征在于，在所述双特异性抗体的编码序列上游还包括编码信号肽的核苷酸序列，优选地，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.:7所示。

11.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种。

12.如权利要求11所述重组载体，其特征在于，所述重组载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体、瞬时转染载体和腺病毒载体中的一种或多种。

13.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞能够内源性分泌囊泡，且所述基因工程细胞的基因组整合有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种，或者所述基因工程细胞的细胞内含有重组载体，所述重组载体含有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种；

其中，所述囊泡的表面具有磷脂双分子层。