[发明专利]双特异性抗体修饰囊泡、双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、方法和应用

说明书

本发明涉及一种双特异性抗体修饰囊泡，其包括囊泡和结合于囊泡表面的双特异性抗体；其中，双特异性抗体与囊泡表面的跨膜结构域相结合；双特异性抗体包括第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域；第一抗原结合结构域为CD19抗原结合结构域或HER2抗原结合结构域，第二抗原结合结构域为CD3抗原结合结构域。该双特异性抗体修饰囊泡可以显著延长双特异性抗体药物的半衰期，增加患者依从性。还涉及双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、基因工程细胞的制备方法、双特异性抗体修饰囊泡的制备方法、应用、药物组合物和双特异性抗体修饰囊泡中双特异性抗体的结合密度的测试方法。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，进一步涉及抗体技术领域，特别涉及一种双特异性抗体修饰囊泡、双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、基因工程细胞的制备方法、双特异性抗体修饰囊泡的制备方法、应用、药物组合物以及双特异性抗体修饰囊泡中双特异性抗体的结合密度的测试方法。

背景技术

双特异性抗体(BsAb)是一类在治疗癌症方面有着巨大前景的生物制剂，BsAb由肽链连接两个抗体单链可变片段组成，分别可识别靶细胞和效应细胞，能在两者间起到桥梁连接作用。例如，Bispecific T cell engager(BiTE，双特异性T细胞结合器)是双特异性抗体的一种，其效应细胞识别端通过结合T细胞表面的CD3e可有效激活T细胞，并介导T细胞对肿瘤细胞的不依赖MHC复合物的杀伤效应。又如，(Blinatumomab)是一种结合T细胞上的CD3和靶细胞上的CD19的BiTE，是FDA批准的第一个双特异性免疫治疗药物，已被证明对CD19+B细胞前体ALL(急性淋巴细胞白血病)有效，目前用于费城染色体阴性复发或难治性ALL患者的二线治疗。相比于嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法，前述的BsAb免疫疗法可以引导T细胞向肿瘤细胞趋向，而且双特异性免疫治疗药可以生产为成品药物，易于控制剂量，并且降低了患者个人的用药成本。然而，BiTEs和其他基于双特异性抗体的生物制剂均属于蛋白制剂，半衰期短，使用时不可避免的会有损耗，在临床上需要注射泵连续给药，便捷性差，患者用药过程长，依从性差。基于此，目前亟待开发新的双特异性抗体药物。

发明内容

基于此，本发明的目的包括提供一种双特异性抗体修饰囊泡，可以显著延长双特异性抗体药物的半衰期，降低临床上需要注射泵连续给药的压力，可增加患者依从性。本发明还提供双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、基因工程细胞的制备方法、双特异性抗体修饰囊泡的制备方法、应用(如在制备药物中的应用)、药物组合物和双特异性抗体修饰囊泡中双特异性抗体的结合密度的测试方法。

在本发明的第一方面，提供一种双特异性抗体(BsAb)修饰囊泡，其包括囊泡和结合于所述囊泡表面的双特异性抗体(BsAb)；

其中，所述双特异性抗体与所述囊泡表面的膜结构相结合；所述双特异性抗体包括第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域；所述第一抗原结合结构域为CD19抗原结合结构域或HER2抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域为CD3抗原结合结构域。

在一些实施方式中，所述双特异性抗体在所述囊泡表面的结合密度为每平方微米囊泡表面结合的AsAb的平均数量大于100个；和/或，所述双特异性抗体修饰囊泡的直径为80～1000nm，优选平均直径为100～200nm。

在一些实施方式中，任一种所述双特异性抗体独立地为BiTE抗体。

在一些实施方式中，任一种所述双特异性抗体独立地包括依次串联的所述第一抗原结合结构域、连接肽、所述第二抗原结合结构域、铰链区和跨膜结构域；其中，所述跨膜结构域嵌入到所述囊泡表面的磷脂双分子层中而结合。

在一些实施方式中，所述双特异性抗体修饰囊泡满足如下的任意一个特征、任意多个部分特征或全部特征：

(a1)所述第一抗原结合结构域包含氨基酸序列如SEQ ID No.:1所示的抗CD19单链抗体可变区，或者，包含氨基酸序列如SEQ ID No.:2所示的抗HER2单链抗体可变区；