[发明专利]一种高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌

权利要求书

1.一种用于在枯草芽孢杆菌中高效表达有机磷农药水解酶MPH的表达盒，其特征在于序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的表达盒在构建高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌中的应用。

3.权利要求1所述的表达盒在制备有机磷农药水解酶MPH中的应用。

4.一种含权利要求1所述的表达盒的基因片段，其特征在于序列如SEQ ID NO.9所示。

5.权利要求4所述的基因片段在构建高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌中的应用。

6.权利要求4所述的基因片段在制备有机磷农药水解酶MPH中的应用。

7.一种构建高效表达有机磷农药水解酶MPH且无抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)构建不含抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌表达菌株；

(2)合成SEQ ID NO.9所示的基因片段UP-MPH表达盒-DOWN；将片段UP-MPH表达盒-DOWN导入菌株PD7-PC的感受态细胞，在含有5mM对氯苯丙氨酸的平板上筛选；进而通过PCR扩增和测序验证后，获得高效表达有机磷农药水解酶MPH且无抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌菌株PD7-M3。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于构建不含抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌表达菌株的方法参照Zhou et al..2017.Applied MicrobiologyBiotechnology.https://doi:10.1007/s00253-016-7906-9进行。

9.按照权利要求7或8所述的方法构建的高效表达有机磷农药水解酶MPH且无抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌。

10.一种制备有机磷农药水解酶MPH的方法，其特征在于包括以2％接种量将权利要求9中所述的枯草芽孢杆菌种子液接种至2×SR培养基中，在37℃和180-220转/分钟的条件下培养30-40小时。