[发明专利]可用于检测与甲基苯丙胺成瘾相关的微小RNA的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种可用于检测与甲基苯丙胺成瘾相关的微小RNA的试剂盒及其应用，其特征在于：包括用于检测血浆及其外泌体中hsa‑miR‑320的hsa‑miR‑320a‑3p、hsa‑miR‑320b及hsa‑miR‑320c；与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的试剂盒将hsa‑miR‑320的hsa‑miR‑320a‑3p、hsa‑miR‑320b及hsa‑miR‑320c联合使用以作为甲基苯丙胺成瘾辅助诊断的标志物，hsa‑miR‑320在血浆和外泌体中的均能表达，仅需少量样品即可快速、准确地完成甲基苯丙胺成瘾的检测，灵敏度高，准确率高，检测快速。

技术领域

本发明涉及一种血浆及其外泌体中hsa-miR-320的检测方法，尤其涉及一种用于检测与甲基苯丙胺成瘾相关的微小RNA水平的试剂盒及其应用。

背景技术

甲基苯丙胺作为苯丙胺类兴奋剂中的一种，具有起效快、作用时间长、合成容易、吸食简单等特点。与海洛因等传统毒品相比，甲基苯丙胺滥用趋势更严峻、危害更严重，已成为我国毒品滥用最重要的毒品。目前，甲基苯丙胺成瘾的生物学机制尚未完全阐明，临床诊断还基于DSM-V问卷主观报告为主，没有客观的诊断指标和有效的治疗药物，这为国家开展毒品整治工作和临床甲基苯丙胺成瘾患者的诊治带来了困难。因此，开发无创、客观、灵敏度和特异性高的生物标志物具有重要的科学价值和临床意义。

外泌体(exosome)是细胞外囊泡(extra-cellular vesicles，EV)的重要组成部分，是由细胞分泌的脂质双层结构囊泡，直径约为50～150nm，其包裹着来自于宿主细胞的核酸、蛋白质和脂质，如信使一般穿梭于各个细胞与组织之间，发挥着细胞与组织之间相互联系和相互交流的功能。

Exosome(是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡)，内含有微小RNA(MicroRNAs，miRNAs)，miRNAs是广泛存在于生物体内长约22个核苷酸的非编码单链小RNA分子，几乎所有的真核细胞中都存在，主要通过与靶基因mRNA的3'UTR互补配对，使靶基因mRNA降解或抑制其翻译。研究证实miRNAs对中枢神经系统发育、增殖、分化、凋亡及突触可塑性的调控作用提示其在神经精神疾病包括甲基苯丙胺成瘾中可能扮演着重要的角色。外周循环(血浆、唾液、脑脊液等)体液中稳定存在exosome和miRNAs能够客观、特异地反映机体生物过程和疾病状态，对生物体受到损坏时及时预警，具有重大的临床应用价值。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种用于甲基苯丙胺辅助诊断的检测试剂盒。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种利用上述甲基苯丙胺辅助诊断的检测试剂盒检测血浆外泌体中hsa-miR-320分子标记物的方法。

本发明所要解决的第三个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种利用上述甲基苯丙胺辅助诊断的检测试剂盒检测血浆中hsa-miR-320分子标记物的方法。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：该用于甲基苯丙胺辅助诊断的检测试剂盒，包括用于检测血浆及其外泌体中hsa-miR-320的hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-320b及hsa-miR-320c的联合试剂；

其中hsa-miR-320a-3p在基因组上的定位为：chr8:22244966-22245037；

hsa-miR-320b在基因组上的定位为：

chr1:224257040-224257110/chr1:116671746-116671817；

hsa-miR-320c在基因组上的定位为：

chr18:21683518-21683589/chr18:24321675-24321746；