[发明专利]靶向TP53基因的sgRNA及其应用在审
| 申请号： | 202211070621.8 | 申请日： | 2022-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN115820636A | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 杨世华;蓝勇丹 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/89;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州正明知识产权代理事务所(普通合伙) 44572 | 代理人： | 张丽 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 tp53 基因 sgrna 及其 应用 | ||
1.一种靶向敲除TP53基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA为TP53-sgRNA 2-7和TP53-sgRNA 5-8，其核苷酸序列如下所示：
TP53-sgRNA 2-7：5’-CCGGTTCATGCCGCCCATGC(AGG)-3’；
TP53-sgRNA 5-8：5’-GGCAAGGCTCCCCTTTCTTG(CGG)-3’。
2.一种sgRNA的应用，其特征在于，所述sgRNA为权利要求1所述的靶向敲除TP53基因的sgRNA，所述应用为所述sgRNA在TP53基因敲除领域中的应用。
3.一种食蟹猴TP53基因敲除的方法，其特征在于，包括如下步骤：体外合成权利要求1所述的靶向敲除TP53基因的sgRNA，与Cas9 mRNA混合注射入食蟹猴胚胎，得到TP53基因敲除的食蟹猴胚胎。
4.如权利要求3所述的食蟹猴TP53基因敲除的方法，其特征在于，所述体外合成靶向敲除TP53基因的sgRNA的具体操作步骤如下：
(1)根据权利要求1所述的靶向敲除TP53基因的sgRNA，设计合成引物X，然后以px459载体为模板进行PCR扩增，得到转录DNA模板；
(2)将步骤(1)制得的转录DNA模板进行体外转录，得到所述sgRNA。
5.如权利要求4所述的食蟹猴TP53基因敲除的方法，其特征在于，所述的引物X的核苷酸序列如下所示：
TP53-sgRNA 2-7-Fp：TAATACGACTCACTATAG CCGGTTCATGCCGCCCATGCGTTTTAGAGCTAGAAATAGC；
TP53-sgRNA 2-7-Rp：AGCACCGACTCGGTGCCACTT；
TP53-sgRNA 5-8-Fp：TAATACGACTCACTATAG GGCAAGGCTCCCCTTTCTTGGTTTTAGAGCTAGAAATAGC；
TP53-sgRNA 5-8-Rp：AGCACCGACTCGGTGCCACTT。
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