[发明专利]靶向人LILRB2的纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗LILRB2的纳米抗体、编码所述纳米抗体的核酸、包含所述核酸的表达载体、包含所述纳米抗体的药物组合物、以及制备药物的用途。

技术领域

本发明属于抗体工程领域，具体涉及一种用于诊断或治疗肿瘤的治疗性单域抗体，特别是涉及一种抗LILRB2的纳米抗体、其衍生蛋白以及用于制备药物的用途。

背景技术

纳米抗体是目前最小的抗体分子，最初由比利时科学家Hamers在骆驼血液中发现，它是工程化抗体产品中备受关注的一类。纳米抗体主要优点：一是体积是普通抗体的1/10，因为体积小，其在动物组织体内的穿透力强，如，可以通过人体的脑组织，可以达到高密度的肿瘤内部，而普通抗体却不能，这使得可以通过纳米抗体来治疗某些肿瘤或脑部疾病；二是抗原特异性好；三是易于基因改造，方便人工改造以获得对抗不同病原的抗体；四是稳定性高，如，纳米抗体在体内不被自然分解的时间比普通抗体长(意味着药效时间更持久)，纳米抗体甚至能从人胃中通过而保持有效性。

LILRB2，又称ILT4，主要在髓系细胞上表达，包括单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞。基因学研究显示多种肿瘤微环境中的肿瘤关联巨噬细胞(TAM)高表达LILRB2，抑制LILRB2(小鼠的对应蛋白叫Pirb)降低Treg和MDSC在肿瘤组织的侵入。动物实验显示Pirb抗体抑制抑制肿瘤生长，并与PD-1抗体有协同作用。LILRB2主要在骨髓细胞表达、其它组织表达有限，这令on-target、off-tissue毒性比较轻微。人LILRB2是髓细胞成熟过程中重要的稳态表面调节因子，是一种有前途的、专门针对髓细胞功能测定的髓免疫检查点靶点，具有重要的治疗价值。

发明内容

现有技术中的ScFv、Fab或全IgG类抗LILRB2抗体分子，结构复杂、分子较大，虽然能将活性分子连接到LILRB2上，但影响活性分子的功能、方法复杂、负载效率也较低；纳米抗体分子较小、易于操作，但人源化程度低、亲和力不高，延长半衰期的性能有待进一步提高。

针对上述现有技术的不足，本发明提供一系列抗LILRB2纳米抗体序列及制备方案。

第一方面，本发明提供一种抗LILRB2的纳米抗体，根据本发明的实施例，所述纳米抗体能够特异性结合LILRB2，且所述纳米抗体中的VHH链的互补决定区CDR为选自下组的一种或多种：

(1)SEQ ID NO：9所示的CDR1，SEQ ID NO：10所示的CDR2，和SEQ ID NO：11所示的CDR3；

(2)SEQ ID NO：12所示的CDR1，SEQ ID NO：13所示的CDR2，和SEQ ID NO：14所示的CDR3；

(3)SEQ ID NO：15所示的CDR1，SEQ ID NO：16所示的CDR2，和SEQ ID NO：17所示的CDR3；

(4)SEQ ID NO：18所示的CDR1，SEQ ID NO：19所示的CDR2，和SEQ ID NO：20所示的CDR3；

(5)SEQ ID NO：21所示的CDR1，SEQ ID NO：22所示的CDR2，和SEQ ID NO：23所示的CDR3。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述纳米抗体是人源化的VHH或骆驼源化的VHH。

进一步，在本发明的一些实施方案中，上述纳米抗体具有如SEQ ID NO：3、4、5、6、7任一项所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：3、4、5、6、7任一项所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。

本发明所述的“至少80％同一性”为例如至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性等≥80％的任何百分比的同一性。