[发明专利]评价食用植物油安全的快速检测试剂盒、制备方法及其应用

说明书

本发明涉及评价食用植物油安全性的时间分辨荧光试剂盒、制备方法及其应用。包括荧光试纸条和含有铕标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体、铕标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、铕标记的抗辣椒素类物质通用单克隆抗体的样品反应瓶，荧光试纸条的一面从上至下依次为吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫于连接处交叠相接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜设有横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线位于质控线下方，个数为两条或三条，呈间隔分布，每条检测线上分别包被有一种待检物‑蛋白偶联物。能在一条试纸条上实现多靶标物的同步、快速检测。用于食用植物油质量安全评价，鉴别餐厨废弃油及发现食用植物油中强致癌物。

技术领域

本发明涉及食用植物油安全领域，具体涉及一种检测评价食用植物油安全的快速检测试剂盒、制备方法及其应用。

背景技术

我国是世界上最大的食用植物油生产和消费国。由于油料及食用油供给形势严峻，植物油原料及加工过程中危害因子的影响，导致食用油质量安全事件频发。比如餐厨废弃油脂回流餐桌引起的食用油质量安全问题，来自油脂原料及加工过程中的苯并[a]芘、黄曲霉毒素等强致癌物污染问题，成为全球食品安全领域研究的热点难点。

苯并[a]芘可产生于油脂加工过程中，对人体具有致畸、致癌和致突变性。黄曲霉毒素B₁是毒性最强的一类真菌毒素，属一类致癌物，可发生在油料原料的种、收、储、运、加等各环节。辣椒素类化合物是使辣椒具有辛辣刺激的主要化学物质，其成分主要包括辣椒素、二氢辣椒素、高二氢辣椒素、降二氢辣椒素、高辣椒素等化合物。其中辣椒素和二氢辣椒素约占辣椒素类物质总量的90％。合成辣椒素被广泛应用于医药、杀虫剂、防污涂料、军事武器等领域。将苯并[a]芘与黄曲霉毒素、辣椒素类物质结合，对食用油质量安全进行检测，可以大大提高食用油安全性判别的准确度。

发明内容

本发明涉及一种评价食用植物油安全性的时间分辨荧光试剂盒及制备方法。其具有操作简单、检测快速、灵敏度高的特点，可同步检测样品中苯并[a]芘、黄曲霉毒素B₁和辣椒素类物质的含量，用于食用植物油的质量安全评价。

本发明为解决上述技术问题，采用了如下技术方案：

评价食用植物油安全性的时间分辨荧光试剂盒，包括荧光试纸条和含有铕标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体、铕标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、铕标记的抗辣椒素类物质通用单克隆抗体的样品反应瓶，荧光试纸条的一面从上至下依次为吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫于连接处交叠相接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜设有横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线位于质控线下方，个数为两条或三条，呈间隔分布，每条检测线上分别包被有一种待检物-蛋白偶联物，所述的待检物为苯并[a]芘、黄曲霉毒素B1、辣椒素类物质，所述待检物-蛋白偶联物为苯并[a]芘-卵清白蛋白偶联物(BAP-OVA)、黄曲霉毒素B1-卵清白蛋白偶联物(AFB1-OVA)、辣椒素类物质-卵清白蛋白偶联物(CAP-OVA)，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述的抗苯并[a]芘单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO:C201882的杂交瘤细胞株BBBE1H1分泌产生的；所述杂交瘤细胞株BBBE1H1分泌于2018年4月3日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学。

按上述方案，所述铕标记的抗苯并[a]芘单克隆抗体的制备方法如下：将铕标记试剂加硼酸缓冲液超声，然后加EDC溶液，振荡混匀，离心，去上清，加硼酸缓冲液复溶，振荡混匀，加入抗苯并[a]芘单克隆抗体，摇床反应，离心去上清，封闭，分装冻干。

按上述方案，所述铕标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法如下：将铕标记试剂加硼酸缓冲液超声，然后加EDC溶液，振荡混匀，离心，去上清，加硼酸缓冲液复溶，振荡混匀，加入抗苯并[a]芘单克隆抗体，摇床反应，离心去上清，封闭，分装冻干。