[发明专利]一种快速检测宠物病原体核酸检测的试剂、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种快速检测宠物病原体核酸检测的试剂，其特征在于：

所述的试剂包括提取液、终止液、TSA反应液、Cas12a检测液、胶体金试纸条；

所述的提取液包括强碱氢氧化物、Tris-HCl；

所述的终止液包括醋酸、Tris醋酸；

所述的TSA反应液包括UvsX蛋白、UvsY蛋白、GP32蛋白、Bsu蛋白、dNTP、ATP、Tris缓冲液、磷酸肌酸、肌酸激酶、聚乙二醇35000及MgOAc；

所述的Cas12a检测液包括Cas12a蛋白、NaCl、Tris-HCl、MgCl₂、BSA、crRNA及FAM-Bio修饰的ssDNA；

所述的胶体金试纸条包括T带与C带，其中T带标记有链霉亲和素，C带标记有抗-抗FAM抗体。

2.根据权利要求1所述的快速检测宠物病原体核酸检测的试剂，其特征在于：

所述的提取液中：

所述的强碱氢氧化物的质量浓度为25mM～500mM，所述的强碱氢氧化物为NaOH，

所述的Tris-HCl的质量浓度为10mM～70mM，

所述的EDTA的质量浓度为10mM～50mM；

所述的提取液的pH值为11.4～13.7。

3.根据权利要求2所述的快速检测宠物病原体核酸检测的试剂，其特征在于：

所述的终止液中：

所述的醋酸的质量浓度为1M～5M，

所述的Tris-醋酸的质量浓度为1M；

所述的终止液的pH值为2～2.5。

4.根据权利要求1所述的快速检测宠物病原体核酸检测的试剂，其特征在于：

所述的TSA反应液中：

所述的UvsX蛋白的质量浓度为100-300ng/μL，

所述的UvsY蛋白的质量浓度为50-100ng/μL，

所述的GP32蛋白的质量浓度为100-500ng/μL，

所述的Bsu蛋白的质量浓度为50-200ng/μL，

所述的dNTP的质量浓度为150-300μM，

所述的ATP的质量浓度为2-10mM，

所述的Tris缓冲液的质量浓度为20-80mM，

所述的磷酸肌酸的质量浓度为20-80mM，

所述的肌酸激酶的质量浓度为30-100ng/μL，

所述的聚乙二醇35000的质量浓度为1-7％(w/v)，

所述的MgOAc的质量浓度为20mM。

5.根据权利要求1所述的快速检测宠物病原体核酸检测的试剂，其特征在于：

所述的Cas12a检测液中：

所述的Cas12a蛋白的质量浓度为1-10uM，

所述的NaCl的质量浓度为20-75mM，

所述的Tris-HCl的质量浓度为5-15mM，

所述的MgCl₂的质量浓度为1-20mM，

所述的BSA的质量浓度为50-150ug/ml，

所述的crRNA的质量浓度为10-50nM，

所述的FAM-Bio修饰的ssDNA的质量浓度为1-100nM，

所述的Cas12a检测液的pH值为7.9。

6.一种含有权利要求1所述的试剂的试剂盒。

7.一种如权利要求6所述的试剂盒在检测宠物病原体核酸中应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

包括以下步骤：

(1)利用所述的提取液提取样本中的核酸，获得样本核酸溶液；

(2)将所述的终止液全部加入步骤(1)中所获得的样本核酸溶液，以中和样本核酸溶液的pH并得到混合液；其中混合的pH值为6.5-8；

(3)利用所述的混合液进行扩增反应并检测样本中的核酸。

所述混合液的pH为6.5～8。