[发明专利]一种核酸提取纯化试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种核酸提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1) 裂解结合：向血浆样品中加入蛋白酶k进行消化，同时加入超顺性纳米磁珠和裂解结合液进行游离DNA吸附；

(2) 洗脱转化：将步骤（1）中磁珠吸附的游离DNA洗脱下来，进行亚硫酸盐转化；

(3) 二次结合：往离心纯化柱中加入裂解结合液和转化完成的DNA溶液，吸附转化后的游离DNA（BiscfDNA）；

(4) 洗涤脱磺：向步骤（3）中离心柱吸附的BiscfDNA加入脱磺液，进行脱磺；

(5) 洗涤纯化：对步骤（4）中脱磺化后的BiscfDNA进行洗涤纯化；

(6) 晾干洗脱：将步骤（5）中纯化后的BiscfDNA室温晾干，然后进行洗脱。

2.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（3）中裂解结合液为Tris-HCl、聚乙二醇、异丙醇、异硫氰酸胍、盐酸胍、NaCl、曲拉通X-100、EDTA、柠檬酸钠、柠檬酸中的一种或几种组合。

3.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（2）中亚硫酸盐转化液为3-6mol/L，pH为4.5-6.0的亚硫酸氢钠和浓度为20-100mM/L的对苯二酚的混合溶液。

4.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（4）中脱磺液为10-200mM/L NaOH的80%的乙醇溶液。

5.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（4）和步骤（5）中洗涤液为80%的乙醇溶液。

6.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（2）和步骤（6）中洗脱液为纯化水。

7.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（2）转化条件为95-98℃孵育5-8min后54-64℃孵育20-50min。

8.根据权利要求1所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，步骤（1）中蛋白酶k的浓度为15-25mg/ml，磁珠为表面修饰有羟基的二氧化硅包被的Fe₃O₄颗粒，其粒径为100-1000nm，浓度为20-100mg/ml。

9.根据权利要求2所述的核酸提取纯化方法，其特征在于，裂解结合液为10mM/L，pH为5.0-6.0的Tris-HCl、EDTA、浓度为2-6mol/L的异硫氰酸胍、体积分数分别为10%-30%的异丙醇和10%-50%的曲拉通X-100的混合液。

10.一种核酸提取纯化试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下组件：蛋白酶k溶液、磁珠悬浮液、离心纯化柱、收集管、裂解结合液、亚硫酸盐转化液、脱磺液、洗涤液。