[发明专利]一种痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法在审
| 申请号： | 202211078074.8 | 申请日： | 2022-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN115927679A | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 丁芳;于江莲;刘国媛;洪霓;王国平 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 张杰 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 痕量 柑橘 黄龙 病菌 快速 检测 方法 | ||
1.一种痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、垂直切取柑橘叶片的叶中脉和/或叶柄得到薄片样品，加入裂解液中研磨处理后离心；
步骤二、取上清液进行PCR扩增反应，并对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
2.根据权利要求1所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述薄片样品取自柑橘叶片的叶中脉的前端和/或叶柄的中脉。
3.根据权利要求2所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述薄片样品的厚度为0.1～0.15mm。
4.根据权利要求1所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述裂解液为NaOH溶液。
5.根据权利要求4所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述裂解液为0.5mol/L的NaOH溶液。
6.根据权利要求1所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应所用引物对的序列如SEQ ID NO.1～2所示。
7.根据权利要求6所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的体系为：2×Master Mix 7.5μL，10μmol/μL引物各0.2μL，上清液1.0μL，去离子水余量，共计15.0μL。
8.根据权利要求6所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的退火温度为58℃。
9.根据权利要求8所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的程序具体为：94℃、3min；94℃、30s，58℃、30s，72℃、20s，30个循环；72℃5min。
10.根据权利要求1所述的痕量柑橘黄龙病菌快速检测方法，其特征在于，所述扩增产物采用1.2％琼脂糖凝胶进行电泳分析。
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