[发明专利]一种快速分离鉴定益生菌种属和益生功能的筛选方法

说明书

本发明公开了一种快速分离鉴定益生菌种属和益生功能的筛选方法，筛选步骤分为益生菌分离鉴定和体外抑菌效果试验，所述益生菌分离鉴定步骤如下：S1：培养基准备，采用LB固体和液体培养基、乳酸细菌培养基MRS固体和液体培养基；S2：菌液制备，无菌采集盲肠内容物和黏膜，置于无菌生理盐水中，混匀；S3：菌种分离，分别对乳酸菌类分离和芽孢杆菌分离；S4：培养；S5：初筛纯化，进行乳酸菌纯化和枯草芽孢杆菌纯化；S6：鉴定。本发明以鸡盲肠黏膜和粪便为原料，接种在LB和MRS培养基，37摄氏度厌氧培养24‑48h，扩增产物送检生工测序，测序结果通过NCBI网站Blast分析，快速鉴别细菌种属，可实现对批量益生菌鉴定和能力筛查，提高产能品研发环节的开发效率。

技术领域

本发明涉及益生菌研发技术领域，具体为一种快速分离鉴定益生菌种属和益生功能的筛选方法。

背景技术

益生菌是通过定殖在体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。通过调节宿主黏膜与系统免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收保持肠道健康的作用，从而产生有利于健康作用的单微生物或组成明确的混合微生物。

经过海量检索，发现现有技术：公开号为：CN114867844A，公开了鉴定益生菌菌株聚生体的方法，所述益生菌菌株属于例如乳杆菌属(Lactobacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、片球菌属(Pediococcus)和魏斯氏菌属(Weissella)，可用于食品补充剂的制备、食品生产以及旨在将麸质安全快速降解为无毒、无免疫原性消化物的药物应用。

传统的益生菌筛选和分离是基于血清学的方法，该方法准确性差，且费时费力。因此，利用基因工程的方法，建立一种益生菌的基因分型与分析方法，可快速促进益生菌产品的筛选与开发，具有较好的实用意义。根据宿主特异性理论，直接从鸡盲肠黏膜和粪便中取样分离，动物肠道具有特定的微生态环境，肠道内固有菌群对宿主肠道微生态环境具有较强适应性，因此选定肠道内固有菌群作为益生菌筛选的来源有利于益生菌的定植。同时经过简单的体外牛津杯法抑菌试验可以快速的筛选出益生作用强的优良菌种，为下一步产品开发奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速分离鉴定益生菌种属和益生功能的筛选方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种快速分离鉴定益生菌种属和益生功能的筛选方法，筛选步骤分为益生菌分离鉴定和体外抑菌效果试验，所述益生菌分离鉴定步骤如下：

S1：培养基准备，采用LB固体和液体培养基、乳酸细菌培养基MRS固体和液体培养基；

S2：菌液制备，无菌采集盲肠内容物和黏膜，置于无菌生理盐水中，混匀；

S3：菌种分离，分别对乳酸菌类分离和芽孢杆菌分离；

S4：培养；

S5：初筛纯化，进行乳酸菌纯化和枯草芽孢杆菌纯化；

S6：鉴定。

优选的，基于益生菌分离鉴定步骤的S2中：

菌液制备流程为：选择健康活鸡5只，实验前1周禁止使用任何抗生素药物，每只无菌采集盲肠内容物和粘膜1g放置于盛有45mL无菌生理盐水的离心管中，涡旋混匀，制成菌液。

优选的，基于益生菌分离鉴定步骤的S3中：

乳酸菌类分离流程为：采用无菌枪头从中吸取100ul悬液加入盛有900ul无菌生理盐水的1.5ml离心管中充分混匀，然后用无菌枪头从此离心管中吸取100ul加入另一盛有900ul无菌生理盐水的1.5ml离心管中，吹吸混合均匀；