[发明专利]一种产琥珀酸放线杆菌CRISPRi系统构建方法在审
| 申请号： | 202211080124.6 | 申请日： | 2022-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN115992161A | 公开（公告）日： | 2023-04-21 |
| 发明（设计）人： | 郑璞;陈春梅;吴丹;陈鹏程 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/113;C12N15/54;C12N9/22;C12N1/21;C12P7/46;C12R1/01 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 琥珀酸 放线 杆菌 crispri 系统 构建 方法 | ||
1.一种CRISPRi系统，其特征在于，所述CRISPRi系统包含质粒pCpf1-CRISPRi，所述质粒pCpf1-CRISPRi包含编码dcpf1的基因和crRNA表达框；所述编码dCpf1的基因位于pckA启动子下游，所述crRNA表达框位于dCpf1基因的下游。
2.根据权利要求1所述的CRISPRi系统，其特征在于，所述crRNA表达框包含frd启动子、crRNA序列和rrnB t1终止子。
3.根据权利要求2所述的CRISPRi系统，其特征在于，所述crRNA表达框的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1所述的CRISPRi系统，其特征在于，所述dCpf1如下(a)～(c)：
(a)来源于Francisella tularensis subsp.Novicida；，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
(b)在(a)的基础上，将第917位天冬氨酸突变成丙氨酸；
(c)在(a)的基础上，将第1006位的谷氨酸突变成丙氨酸。
5.权利要求1～4任一所述CRISPRi系统在产琥珀酸放线杆菌基因编辑中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用为将根据靶基因序列设计的crRNA靶向序列构建至权利要求1～4任一所述CRISPRi系统，转入产琥珀酸放线杆菌，获得基因抑制菌株。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述产琥珀酸放线杆菌包括产琥珀酸放线杆菌ATCC 55618、CGMCC NO.1593、CCTCC NO：M 2012036、CGMCC NO.1716、CCTCCM2011399及其突变株。
8.含有权利要求1～4任一所述CRISPRi系统的微生物细胞。
9.权利要求8所述的微生物细胞在制备含有琥珀酸的产品中的应用。
10.权利要求1～4任一所述CRISPRi系统在研究产琥珀酸放线杆菌特定基因的生物学功能中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202211080124.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
