[发明专利]一种快速构建衰老细胞的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种快速构建衰老细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、复制性衰老细胞的构建：取PDL小于30的年轻细胞于细胞培养皿中，加入含10％的FBS和1％的青霉素-链霉素的RMPI1640培养基培养，当所述年轻细胞的细胞融合度为70％～80％时，利用0.25％的胰蛋白酶消化传代，细胞培养140天，得到复制性衰老细胞；

S2、条件培养基的制备：将步骤S1中得到的所述复制性衰老细胞于细胞培养皿中过夜贴壁后更换并置于含10％的FBS和1％的青霉素-链霉素的RMPI1640培养基中，继续培养48～52h后收集细胞上清液，接着离心后过滤，取滤液按照1∶2的比例与含10％FBS和1％青霉素-链霉素的RMPI1640培养基混合，得到条件培养基；

S3、衰老细胞的构建：取PDL小于30的年轻细胞于细胞培养皿中，加入步骤S2中得到的所述条件培养基，当所述年轻细胞的细胞融合度为70％～80％时，利用0.25％的胰蛋白酶消化传代，细胞培养28天，得到衰老细胞。

2.根据权利要求1所述的快速构建衰老细胞的方法，其特征在于，在步骤S1和步骤S3中，所述年轻细胞的接种密度均为4×10⁵。

3.根据权利要求1所述的快速构建衰老细胞的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述离心的时间为10min，所述过滤的滤孔为0.45μm。

4.根据权利要求1所述的快速构建衰老细胞的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述条件培养基的保存温度为4℃。

5.根据权利要求1至4任一项所述的快速构建衰老细胞的方法，其特征在于，在步骤S1和步骤S3中，所述年轻细胞为永生化人L02肝细胞。

6.一种衰老细胞，其特征在于，采用如权利要求1至5任一项所述的快速构建衰老细胞的方法制备。

7.一种条件培养基，其特征在于，采用如权利要求1至5任一项所述快速构建衰老细胞的方法中的步骤S1和步骤S2制备。

8.一种用于检测如权利要求6所述的衰老细胞的生物标志物组，其特征在于，所述生物标志物组至少包含生物标志物LMNB1、PCNA、TERT、ACTB，或它们的变体或片段。

9.用于检测样品中的衰老细胞的衰老细胞检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测来自测试对象的样品中如权利要8所述的生物标志物组的存在的工具。

10.根据去哪里要求9所述的用于检测样品中的衰老细胞的衰老细胞检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含至少一个对照或参照样品，优选地，其中所述试剂盒包含阴性对照和/或阳性对照。