[发明专利]一种基于内滤效应的用于样品中碱性磷酸酶活力测定的比率荧光分析法

权利要求书

1.一种基于内滤效应的用于样品中碱性磷酸酶活力测定的比率荧光分析法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将样品与孵育缓冲液混合、孵育、静置，得到静置液；

所述孵育缓冲液包括：50mM二乙醇胺、1mM MgCl₂和200～1000μM对硝基苯磷酸二钠，pH值为7.5～11.0；

所述孵育的温度为4～45℃，所述孵育的时间为15～120min；

2)将所述步骤1)得到的静置液与量子点溶液混合，得到混合液，以310nm激发，测定所述混合液在405nm和585nm下的荧光强度，得到585nm与405nm的荧光强度比值，定义为R，将空白样品的荧光强度比值定义为R0，得到R/R0；

所述量子点溶液包括：10mg/ml Mn:ZnS和0.1mg/ml ZnSe@ZnS；

3)将所述步骤2)得到的R/R0代入以下公式，得到样品中碱性磷酸酶活力；

当所述样品为ALP溶液时，公式为：R/R0＝0.03688C_ALP+0.7513，R²＝0.9969，其中C_ALP的单位为U/L；

当所述样品为血清时，公式为：R/R0＝0.02085C_ALP+1.098，R²＝0.9907，其中C_ALP单位为：U/L；

当所述样品为HepG2细胞裂解液时，公式为：R/R0＝0.0597C_HepG2+0.9932，R²＝0.9983其中C_HepG2的单位：个/ml。

2.根据权利要求1所述的比率荧光分析法，其特征在于，所述Mn:ZnS的制备方法包括以下步骤：

A、将硬脂酸锌、硬脂酸和1-十八烯在140℃下混合，得到锌储备液；

B、将硬脂酸锌、硬脂酸锰、硫粉、油胺和1-十八烯在100℃下混合，得到澄清溶液；

C、将所述步骤A得到的锌储备液与步骤B得到的澄清溶液在250℃下混合，温度持续30min，将得到的混合物抽滤、洗涤，将得到的沉淀物干燥，得到油溶性Mn:ZnS；

D、将所述步骤C得到的油溶性Mn:ZnS与氯仿、3-巯基丙酸混合、超声、离心，得到沉淀；

E、将所述步骤D得到的沉淀与四甲基氢氧化铵溶液混合、超声、离心，得到上清液，调节上清液的pH值为7～8后进行真空干燥，得到水溶性Mn:ZnS，即得到Mn:ZnS。

3.根据权利要求2所述的比率荧光分析法，其特征在于，所述步骤A中硬脂酸锌的摩尔、硬脂酸的摩尔与1-十八烯的体积比为10mmol:10mmol:10ml；

所述步骤B硬脂酸锌的摩尔、硬脂酸锰的摩尔、硫粉的摩尔、油胺的摩尔和1-十八烯的体积比为1mmol:0.05mmol:5mmol:7.5mmol:50ml；

所述步骤C锌储备液与澄清溶液的体积比为1:5。

4.根据权利要求2所述的比率荧光分析法，其特征在于，所述步骤D油溶性Mn:ZnS的质量与氯仿的体积、3-巯基丙酸的体积比为1.5g:10ml:1.6ml；

所述超声的时间为30min；

所述离心的条件包括：离心力为2500g，离心时间为2min。

5.根据权利要求2所述的比率荧光分析法，其特征在于，所述步骤E沉淀的质量与四甲基氢氧化铵溶液的体积比为1.5g:10ml；

所述超声的时间为5min；

所述离心的条件包括：离心力为2500g，离心时间为2min；

所述真空干燥的温度为50℃。