[发明专利]猪塞尼卡病毒合成肽疫苗及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，包括脂化T细胞辅助表位多肽、塞尼卡病毒主要结构蛋白VP1相关的B细胞抗原表位多肽，脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位多肽相串联。

2.根据权利要求1所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，所述串联的方法具体包括将脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位多肽通过至少两个赖氨酸相连接。

3.根据权利要求1所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，所述T细胞辅助表位多肽的T细胞辅助表位来源于破伤风梭菌表面抗原、恶性疟原虫的环孢孢子体外壳蛋白表面抗原或免疫球蛋白重链表面抗原；对T细胞辅助表位多肽人工组合突变优化及三棕榈酸酰基半胱氨酸脂化改造，引入了“Pam₃C”，形成脂化T细胞辅助表位多肽。

4.根据权利要求3所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，脂化T细胞辅助表位多肽包括Th1、Th2、Th3中的一种；

Th1的序列为：Pam₃CVSIDKFRIFSKALNPK；

Th2的序列为：Pam₃CEYLNKIQNSLSTEWSPASVT；

Th3的序列为：Pam₃CLSEIKGVIVHRLEGV。

5.根据权利要求1所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，所述B细胞抗原表位序列为：

KGGKVSFVLCWNSVSSVLPVRWGGASKLSSATRGLPAHCDWGTIY；

所述B细胞抗原表位序列的第10位C与第39位C形成二硫键，通过两个半胱氨酸形成环状结构。

6.根据权利要求1所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括免疫佐剂；脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位串联多肽与所述免疫佐剂混合形成油包水或水包油包水乳液疫苗。

7.根据权利要求6所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，其特征在于，所述免疫佐剂为ISA50V或ISA206；所述串联多肽在疫苗中的剂量为10-50ug/ml。

8.一种根据权利要求1-7中任一项所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、在固相载体上用化学合成的方法合成B细胞抗原表位多肽，然后继续连接至少两个赖氨酸，然后在多肽的最N端赖氨酸的ε-氨基上连接T细胞辅助表位多肽，再连接Fmoc-Pam₂Cys–OH并脱除Fmoc后棕榈酰化N末端形成三棕榈酰化半胱氨酸脂肽，最终得到连接在固相载体上的脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位多肽串联多肽；

S2、通过混合有机酸液将串联多肽从固相载体上切除下来，以醚类沉淀，洗涤得到脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位多肽串联多肽粗品；

S3、通过DMSO氧化脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位多肽串联多肽粗品上的氨基酸巯基环化形成分子内的二硫键；

S4、环化结束后，通过阳离子交换树脂去除溶液中的有机酸，收集流出液；

S5、使用色谱进行纯化；

S6、通过切向流膜包系统浓缩纯化溶液并以注射用水置换溶液去除有机溶剂，得到的水相浓缩液再过滤除菌；

S7、在剪切力作用下，将无菌液与油佐剂混合形成乳液，得到疫苗。

9.根据权利要求8所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗的制备方法，其特征在于，步骤S1中，B细胞抗原表位多肽序列为：KGGKVSFVLCWNSVSSVLPVRWGGASKLSSATRGLPAHCDWGTIY；T细胞辅助表位多肽包括Th1′、Th2′、Th3′中的一种；

Th1′的序列为：VSIDKFRIFSKALNPK；

Th2′的序列为：EYLNKIQNSLSTEWSPASVT；

Th3′的序列为：LSEIKGVIVHRLEGV。

10.一种根据权利要求1-7中任一项所述的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗的应用，其特征在于，用于制备预防和治疗猪塞尼卡病毒病的制剂或用于制备区分感染动物和被免疫动物的制剂。