[发明专利]猪塞尼卡病毒合成肽疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种猪塞尼卡病毒合成肽疫苗及其制备方法与应用；所述合成肽疫苗包括相串联的脂化T细胞辅助表位多肽和塞尼卡病毒主要结构蛋白VP1相关的B细胞抗原表位多肽。本发明的优势包括：合成肽疫苗缺乏传染性病原体，保证绝对安全又可轻易从接种疫苗的动物中区分感染动物，在制备过程中没有释放的风险；合成肽疫苗含有准确的分子划分的免疫原，可以排除有害的序列抗原或其他病原体相关的分子，没有导致毒力的逆转，也没有遗传整合或重组的风险；抗原容易制备，易于合成和放大，对设备及制备环境要求低，疫苗成本相对较低；疫苗的免疫原性通过设计时的结构精细调节得到优化；合成肽疫苗抗原相对稳定，容易实现在简单条件下的运输和储存。

技术领域

本发明涉及合成肽疫苗技术领域，具体涉及一种猪塞尼卡病毒合成肽疫苗及其制备方法和应用，尤其涉及一种针对流行的猪塞尼卡病毒病的合成肽疫苗及其制备方法和与应用。

背景技术

塞尼卡病毒(Seneca valley virus,SVV)属于小RNA病毒科塞尼卡病毒属，也是该属的唯一成员。SVV首先在美国于2002年在细胞培养基污染物分离，最初被定义为溶瘤病毒，但后期证实其能够感染猪，引发猪的原发性水泡病。SVV感染引起猪的鼻吻、蹄部冠状带的水泡病变，同时伴有跛行、厌食和嗜睡等临床表现。与口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎等引起的临床症状无法区分。其传播特性与口蹄疫病毒类似，且与口蹄疫病毒存在混合感染，严重干扰了口蹄疫的防控。

SVV-001具有微小RNA病毒基因组的典型特征，具有标准的L-4-3-4布局，即先导蛋白(L)、P1(裂解VP1、VP2、VP3和VP4四种结构蛋白)、P2(裂解成2A、2B 和2C三种非结构蛋白)、P3(裂解成3A、3B、3C和3D四种非结构蛋白)。

目前在研的SVV疫苗多是传统的灭活疫苗或者是由原核表达的重组蛋白形成疫苗。但是灭活疫苗生产工艺中需要培养病毒，因此对安全等级要求高，生产成本也高；重组蛋白疫苗的抗原常以包涵体形式表达，导致后续产物纯化困难，表达系统翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性一般较低。因此猪塞尼卡病毒合成肽疫苗的研究开发显得尤为重要。

发明内容

为解决现有技术中的缺陷，本发明的目的在于提供一种针对猪塞尼卡病毒具有免疫保护效力的猪塞尼卡病毒合成肽疫苗及其制备方法和与应用。

多肽疫苗是一种依靠短肽片段来设计高靶向诱导免疫反应，从而避免过敏或反应性序列。我们根据结构生物学分析认为位于SVV VP1蛋白G-H环(约183-213残基)中的B 细胞结合位点为一个主要表位，可在自然宿主和动物模型中诱导对该病毒的中和抗体。在感染过程中，T细胞的募集可导致病原体本身或受感染宿主细胞的迅速破坏和清除，从而阻止感染的传播。本发明中设计了一种脂化的T细胞辅助多肽连接B细胞抗原表位的抗原多肽序列，其电荷平衡几乎均匀，该脂肽包含三条连接到肽N端半胱氨酸的棕榈酸酰基链，是一类能够形成肽功能化超分子纳米结构的自组装分子。并且在不同的遗传背景下显示出良好的免疫原性。所以通过脂化的T细胞表位来提供T细胞和B淋巴细胞之间的充分合作，刺激动物体内抗体反应形成的合成肽是一种有吸引力的SVV候选疫苗，它们是高度纯净，结构明确，稳定和使用安全，并且由于它们可以模块化方法制备，并且可以合并融合不同的T细胞辅助多肽。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种猪塞尼卡病毒合成肽疫苗，包括脂化T细胞辅助表位多肽、塞尼卡毒株主要结构蛋白VP1相关的B细胞抗原表位多肽；所述脂化T细胞辅助表位多肽与 B细胞抗原表位多肽相串联。

所述脂化T细胞辅助表位多肽、塞尼卡毒株主要结构蛋白VP1相关的B细胞抗原表位多肽是通过化学合成方法得到。所述脂化T细胞辅助表位多肽与B细胞抗原表位多肽通过化学合成方法相串联。