[发明专利]一种检测BRCA1基因突变的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测BRCA1基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括正义引物、反义引物和耐高温限制性内切酶；

所述正义引物和反义引物为分别结合BRCA1基因c.981_982区的上游和下游的引物；

所述耐高温限制性内切酶切割BRCA1基因c.981_982区野生型片段。

2.根据权利要求1所述的检测BRCA1基因突变的试剂盒，其特征在于，所述正义引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列；

优选地，所述反义引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列。

3.根据权利要求1或2所述的检测BRCA1基因突变的试剂盒，其特征在于，所述耐高温限制性内切酶包括FatⅠ内切酶。

4.根据权利要求1-3任一项所述的检测BRCA1基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应液；

优选地，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、dNTP、PCR反应缓冲液和水；

优选地，所述DNA聚合酶包括高保真DNA聚合酶。

5.一种富集BRCA1基因突变区片段的方法，其特征在于，所述方法包括：

取待测样本DNA作为模板，利用权利要求1-4任一项所述的检测BRCA1基因突变的试剂盒中正义引物和反义引物进行PCR扩增，在PCR扩增产物中加入耐高温限制性内切酶，进行酶切反应，利用酶切反应产物继续进行PCR扩增。

6.根据权利要求5所述的富集BRCA1基因突变区片段的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：

93～98℃预变性3～8min；

93～98℃变性25～35sec，50～55℃退火25～35sec；

70～75℃延伸25～35sec，10～20个循环；

优选地，所述酶切反应的条件为50～60℃反应0.5～2h。

7.一种以非疾病诊断的检测BRCA1基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括：

以权利要求5或6所述的富集BRCA1基因突变区片段的方法富集待测样本中BRCA1基因突变区片段，对富集产物进行测序，根据测序结果进行对比分析，判断待测样本是否存在突变。

8.根据权利要求7所述的以非疾病诊断的检测BRCA1基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)取待测样本DNA作为模板，利用权利要求1-4任一项所述的检测BRCA1基因突变的试剂盒中正义引物和反义引物进行PCR扩增，93～98℃预变性3～8min；93～98℃变性25～35sec，50～55℃退火25～35sec；70～75℃延伸25～35sec，10～20个循环；

(2)向步骤(1)PCR扩增产物中加入耐高温限制性内切酶，50～60℃反应0.5～2h；

(3)利用步骤(2)酶切反应产物继续进行PCR扩增，93～98℃预变性3～8min；93～98℃变性25～35sec，50～55℃退火25～35sec；70～75℃延伸25～35sec，10～20个循环；

(4)对步骤(3)扩增产物进行测序，根据测序结果进行对比分析，判断待测样本是否存在突变。

9.一种检测BRCA1基因突变的装置，其特征在于，所述装置包括富集单元和测序分析单元；

所述富集单元用于执行权利要求5或6所述的富集BRCA1基因突变区片段的方法；

所述测序分析单元用于执行包括：

对富集单元的富集产物进行测序，根据测序结果进行对比分析，判断待测样本是否存在突变。

10.根据权利要求9所述的检测BRCA1基因突变的装置，其特征在于，所述富集单元用于执行包括以下步骤：

(1)取待测样本DNA作为模板，利用权利要求1-4任一项所述的检测BRCA1基因突变的试剂盒中正义引物和反义引物进行PCR扩增，93～98℃预变性3～8min；93～98℃变性25～35sec，50～55℃退火25～35sec；70～75℃延伸25～35sec，10～20个循环；

(2)向步骤(1)PCR扩增产物中加入耐高温限制性内切酶，50～60℃反应0.5～2h；

(3)利用步骤(2)酶切反应产物继续进行PCR扩增，93～98℃预变性3～8min；93～98℃变性25～35sec，50～55℃退火25～35sec；70～75℃延伸25～35sec，10～20个循环；

所述测序分析单元用于执行包括：

对富集单元的富集产物进行测序，根据测序结果进行对比分析，判断待测样本是否存在突变。