[发明专利]一种山麦冬体细胞胚再生的方法

权利要求书

1.山麦冬体细胞胚再生的方法，包括以下步骤：

(1)体胚诱导：将山麦冬无菌苗的叶片切至0.8-1.2cm长，接到体胚诱导培养基上暗培养进行体胚诱导；

(2)体胚增殖：将步骤(1)诱导后的体胚接至体胚增殖培养基上，黑暗条件下进行体胚增殖培养；

(3)体胚出芽：将步骤(2)得到的增殖后的愈伤组织移接至体胚出芽培养基上，黑暗培养直至发芽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述体胚诱导培养基的组成为：MS+2,4-D2mg/L+6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH为5.8。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述暗培养在20-25℃温度下进行，所述暗培养进行4-12周。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述体胚增殖培养基的组成为：MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂7g/L，pH为5.8。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述体胚增殖培养在20-25℃温度下进行2-3周。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：步骤(3)的操作为：将步骤(2)得到的增殖后的愈伤组织转移至体胚出芽培养基上，黑暗培养，出芽后，移到光下，光照培养使其变绿，从而形成正常的山麦冬无菌苗。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述体胚出芽培养基的组成为MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.2mg/L+GA₃1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，或MS+6-BA2 mg/L+GA₃1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH为5.8。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述黑暗培养在20-25℃温度下进行；

所述黑暗培养进行4-12周；

所述光照培养的条件为：每天光照12h，光照强度50-200uM·m^-2·s^-1，培养温度为20-25℃，培养30天更换一次培养基。

9.山麦冬体细胞胚再生的试剂盒，包括体胚诱导培养基、体胚增殖培养基和体胚出芽培养基；

其中，所述体胚诱导培养基的组成为：MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH为5.8；

所述体胚增殖培养基的组成为：MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂7g/L，pH为5.8；

所述体胚出芽培养基的组成为：MS+6-BA 0.1mg/L+NAA 0.2mg/L+GA₃1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L或MS+6-BA2 mg/L+GA₃1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH为5.8。