[发明专利]一种小鼠听觉神经元永生细胞系及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种小鼠听觉神经元永生细胞系，其保藏编号为CCTCC NO：C202275。

2.权利要求1所述的小鼠听觉神经元永生细胞系的构建方法，其特征在于，具体过程为：

（1）C57小鼠听觉神经元细胞的分离培养：将出生1d的C57小鼠取耳蜗解剖蜗轴并酶解消化，重悬单细胞后铺瓶培养；

（2）对分离细胞进行免疫荧光鉴定：细胞爬片后进行免疫荧光染色，观察神经元标记物的染色情况；

（3）采用SV40LT过表达慢病毒转染C57小鼠听神经元细胞：利用SV40LT过表达慢病毒载体即EF1α-SV40-IRES-puromycin载体元件转染螺旋神经节；转染后，细胞扩增3-4代后进行筛选；

（4）C57小鼠听神经元细胞的筛选：利用嘌呤霉素筛选转染成功的细胞；

步骤（1）中所述的酶解采用胰酶与Ⅰ型胶原酶；

上述构建过程中所采用的培养基为含有5%-10%胎牛血清和1μL/ml氨苄青霉素的1640培养基。

3.根据权利要求2所述的小鼠听觉神经元永生细胞系的构建方法，其特征在于，步骤（1）中所述的酶解选用0.25% 胰酶与0.1%Ⅰ型胶原酶。

4.权利要求1所述的小鼠听觉神经元永生细胞系的用途，为以下任意一种或几种：

（1）用于制备听觉神经元细胞动物模型；

（2）用于开发耳聋药物靶点；

（3）用于制备耳聋诊断产品；

（4）用于开发或/和筛选或/和评价耳聋治疗药物。