[发明专利]重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc、构建方法和应用

说明书

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种重组真核表达载体pVAX‑LAMP‑CCHFV‑Gc、构建方法和应用，合成CCHFV毒株的结构蛋白Gc的基因，采用同源重组方法将上述基因插入pVAX‑LAMP质粒载体，构建成pVAX‑LAMP‑CCHFV‑Gc重组真核表达载体。本发明以真核表达载体pVAX1和Gc的完整抗原为基础，构建了真核表达载体pVAX‑Gc，获得了免疫效果良好的重组CCHFV DNA疫苗。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc、构建方法和应用。

背景技术

克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)是一种婢媒自然免疫源性病毒，该病毒可以通过婢虫叮咬而感染，易感染人类，它的临床症状与其他型的出血热相似，潜伏期2-12天左右，临床表现为起病急骤、体温上升、头痛剧烈、恶心呕吐等，有较高的致死率。光学镜下，在鼠脑部的感染组织中能够观察到吉姆萨染色呈嗜碱性的如红细胞大小的细胞质涵体。

针对CCHFV疫苗的研究虽然有很多，但是目前仍未研发出具有良好疗效的疫苗(参考文献：“郭雷鸣,董兆昱,程林峰.克里米亚-刚果出血热病毒疫苗的研究进展[J].热带医学杂志,2018,18(10):5”)，所以开发针对克里米亚-刚果出血热病毒的疫苗仍是非常有必要的研究。

CCHFV的基因组中含有M段、S段以及L段三部分，其中M段编码包膜糖蛋白Gc和Gn，是病毒致病的关键蛋白，现有专利有针对Gc设计的多表位串联产品，无法充分刺激机体的免疫反应。pVAX-LAMP与pVAX1虽然具有一些共同的核苷酸序列，但是二者的功能存在不同。本发明以真核表达载体pVAX-LAMP和Gc的完整抗原为基础，构建了真核表达载体LAMP-Gc，获得了免疫效果良好的重组CCHFV DNA疫苗。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc、构建方法和应用。

本发明提供了一种重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc的制备方法，合成CCHFV毒株的结构蛋白Gc的基因，Gc的基因核苷酸序列参见SEQ ID NO.1，采用同源重组方法将扩增出的上述基因插入pVAX-LAMP质粒载体，构建成pVAX-LAMP-CCHFV-Gc重组真核表达载体。

优选的，上述重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc的制备方法，所述CCHFV毒株为IbAr10200。

优选的，上述重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc的制备方法，插入pVAX-LAMP的酶切为点为EcoR I、Xho I。

优选的，上述重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc的制备方法，鉴定pVAX-LAMP-CCHFV-Gc重组真核表达载体所用的PCR方法的引物序列如下：

Primer-F：

5’-CTGCTGGACGAGAACAGCTTCCTGGACAGCACCGCCA-3’；

Primer-R：

5’-CAGCGATGGGGATCAGCATCCCGATGTGGGTCTTTGTGG-3’。

本发明还提供了一种由上述方法构建的重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc。

本发明还提供了上述重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc的应用，所述pVAX-LAMP-CCHFV-Gc用于制备CCHFV疫苗。

优选的，上述重组真核表达载体pVAX-LAMP-CCHFV-Gc的应用，所述pVAX-LAMP-CCHFV-Gc免疫机体后可以抑制CCHFV tecVLP的感染，所以将所述pVAX-LAMP-CCHFV-Gc用于制备CCHFV tecVLP感染抑制剂。