[发明专利]山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法

权利要求书

1.山茶品种亲缘关系鉴定用引物组，其特征在于，包括如下引物：WRKY-R2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；WRKY-R3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；WRKY-R2B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；WRKY-R3B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；MYB1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；MYB2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；ERF1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；ERF2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；ERF3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；KNOX-1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；KNOX-2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；KNOX-3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；MADS-1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；MADS-2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；MADS-4引，核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；ABP1-1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；ABPI-3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；

上述17条引物可用于鉴定如下53个山茶花品种的遗传多样性：花牡丹，九曲，胭脂牡丹，贝拉，红粉佳人，乔依，财神，羞奇，绯爪芙蓉，六角大红，玛瑟蒂安娜，状元红，超级玫瑰，黄达，叠红玫瑰，心愿，花鹤翎，红十八学士，伯拜范，雪蒂，烈香，午夜飘云，火瀑布，美国大红，欧七，春秋战国，琳布蕾，西利米切尔，红叶贝拉，玉丹，花仙子，六角白，幸福假日，赛牡丹，牛西奥美玉，迷茫的春天，孔雀椿，松子，白十八学士，美人茶，赤丹，狮子笑，午夜，克瑞墨大牡丹，鸳鸯凤冠，火龙珠，芙蓉香波，杰作，金碧辉煌，红露珍，情人节，黄的旋律，秋牡丹。

2.利用权利要求1所述的引物组鉴定山茶花品种多样性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：采用CTAB法提取山茶花总DNA；

S2：将步骤S1中提取的DNA稀释成40ng/μL，之后进行CDDPPCR，PCR体系如下：总体系20μL，其中DNA模板0.8μL，引物0.8μL，2×Pro Taq Master Mix(dye plus)10μL，ddH₂O 8.4μL；PCR反应程序如下：94℃预变性3min，94℃变性，退火温度1min，72℃延伸2min，40个循环，72℃后延伸5min；

S3：扩增产物电泳检测

取5μL步骤S2中的PCR产物，加入2％琼脂糖凝胶孔中，产物加完后，将电泳槽盖上，110V电压，进行电泳45min，后通过凝胶成像仪采集图片进行分析即可。