[发明专利]山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，公开了山茶品种亲缘关系鉴定用引物组，包括17条引物；还公开了利用17条引物组鉴定山茶花品种多样性的方法。本发明筛选到17条引物对本申请所提到的53个山茶品种的种质可进行遗传多样性分析，且多态性位点比率极高，也证明了CDDP分子标记技术可用于人工驯化的山茶品种的亲缘关系鉴定，为后续从分子层面分析山茶品种的亲缘关系奠定了基础。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法。

背景技术

山茶花又名：山茶、茶花，山茶科、山茶属植物属常绿灌木和小乔木，古名海石榴，有玉茗花、耐冬或曼陀罗等别名，又被分为华东山茶、川茶花和晚山茶。茶花的品种极多，是中国传统的观赏花卉，“十大名花”中排名第七，亦是世界名贵花木之一。中国是山茶属植物的世界分布中心，种质资源极其丰富，但是长期的引种和杂交，使茶花品种的遗传背景模糊，品种间亲缘关系难以鉴定，不利于对山茶的进一步研究和品种优化。CDDP(conservedDNA-derived polymorphism)分子标记技术是依据植物中功能基因和基因家族的保守氨基酸序列设计引物，实现快速鉴定不同物种的分子标记手段。由于CDDP是基于功能基因片段设计的引物，因此扩增得到的标记片段可能是目的基因的一部分或与基因紧密连锁，是一种显性标记，具有良好的多态性，在分子标记辅助育种、遗传多样性分析和种质资源鉴定等方面有重要的应用价值。隽逸豪对山东青岛的6个山茶居群做了CDDP分子标记亲缘关系分析，结果表明其遗传多样性水平较高，而目前针对人工驯化的山茶品种的CDDP并无报导。因此，本发明利用CDDP分子标记技术对山茶花多个品种进行CDDP分子标记，从分子层面分析山茶品种的亲缘关系。

发明内容

基于以上问题，本发明提供山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法，本发明筛选到17条引物对本申请所提到的53个山茶品种的种质可进行遗传多样性分析，为后续从分子层面分析山茶品种的亲缘关系奠定了基础。

为解决以上技术问题，本发明提供了山茶品种亲缘关系鉴定用引物组，包括如下引物：WRKY-R2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；WRKY-R3引物，核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示；WRKY-R2B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；WRKY-R3B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；MYB1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；MYB2引物，核苷酸序列如SEQID NO:6所示；ERF1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；ERF2引物，核苷酸序列如SEQ IDNO:8所示；ERF3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；KNOX-1引物，核苷酸序列如SEQ IDNO:10所示；KNOX-2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；KNOX-3引物，核苷酸序列如SEQID NO:12所示；MADS-1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；MADS-2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；MADS-4引，核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；ABP1-1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；ABPI-3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；

上述17条引物可用于鉴定如下53个山茶花品种的遗传多样性：花牡丹，九曲，胭脂牡丹，贝拉，红粉佳人，乔依，财神，羞奇，绯爪芙蓉，六角大红，玛瑟蒂安娜，状元红，超级玫瑰，黄达，叠红玫瑰，心愿，花鹤翎，红十八学士，伯拜范，雪蒂，烈香，午夜飘云，火瀑布，美国大红，欧七，春秋战国，琳布蕾，西利米切尔，红叶贝拉，玉丹，花仙子，六角白，幸福假日，赛牡丹，牛西奥美玉，迷茫的春天，孔雀椿，松子，白十八学士，美人茶，赤丹，狮子笑，午夜，克瑞墨大牡丹，鸳鸯凤冠，火龙珠，芙蓉香波，杰作，金碧辉煌，红露珍，情人节，黄的旋律，秋牡丹。

为解决以上技术问题，本发明还提供了引物组鉴定山茶花品种多样性的方法，包括如下步骤：

S1：采用CTAB法提取山茶花总DNA；