[发明专利]一种复制型dCas9-FokI系统进行高效基因编辑的方法

权利要求书

1.一种用于基因编辑的载体，其特征在于，所述载体能够表达如下（A1）和（A2），并含有如下（A3）和（A4）：

（A1）dCas9-FokI融合蛋白，其编码基因的序列如SEQ ID NO.1所示；

（A2）EBNA1蛋白，其编码基因的序列如SEQ ID NO.2所示；

（A3）oriP元件，其序列如SEQ ID NO.3所示；

（A4）用于插入双sgRNA编码序列的区域，所述区域含有插入位点和位于插入位点上游的启动子。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，sgRNA编码序列插入位点上游的启动子为U6启动子。

3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述载体中还含有药物筛选基因和/或报告基因。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述药物筛选基因为puromycin抗性基因；所述报告基因为ZsGreen报告基因。

5.一种用于基因编辑的载体，其特征在于：所述载体的全序列如SEQ ID No.4所示。

6.含有权利要求1-5中任一项所述载体的重组菌。

7.权利要求1-5中任一项所述载体的应用，其特征在于，包括：

（B1）对生物体或生物细胞进行基因编辑；

（B2）制备用于对生物体或生物细胞进行基因编辑的产品。

8.一种对生物体或生物细胞进行基因编辑的方法，包括如下步骤：

（C1）将针对靶基因的双sgRNA编码序列插入到权利要求1-5中任一项所述载体的插入位点，得到重组载体；

（C2）将所述重组载体导入生物体或生物细胞，从而实现对生物体或生物细胞基因组中靶基因的编辑。